加急见刊

猪德尔塔冠状病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

辛佳亮; 汪伟; 杜倩; 韩知晓; 闭璟珊; 曹亮; 孙文超; 方志超; 郑敏 广西大学动物科学技术学院; 广西南宁530004; 广西壮族自治区动物疫病预防控制中心; 广西南宁530000; 温州大学病毒学研究所; 浙江温州325035; 军事科学院军事兽医研究所; 吉林长春130122; 广西扬翔股份有限公司; 广西贵港537100

摘要：为建立猪德尔塔病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)快速灵敏的诊断方法,采用RT-PCR方法扩增猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)M基因,将M基因克隆到载体pEASY-Blunt Cloning Kit,以构建出的重组质粒作为标准阳性质粒,并以此为模板建立PDCoVM基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并对该方法进行敏感性、特异性和重复性等验证。结果,建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的Ct值与标准品模板在6.57×10^8~6.57×10^1copies/L范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-4.215;该方法特异性强,对PEDV和TGEV猪常见病原检测均无特异性扩增;可重复性良好,组内和组间变异系数均小于2%;灵敏度可达6.57×10^1copies/L;对临床样品的检测,本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的阳性检出率为5.0%。上述结果表明,本研究成功建立了检测PDCoV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,可实现对PDCoV的快速灵敏诊断。

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