加急见刊

人源化IGF-Ⅰ基因的人工合成、重组与表达

李向茸; 王兴陇; 李倩; 邓盈盈; 梁浩勤; 周飚; 冯若飞 西北民族大学生物工程与技术国家民委重点实验室; 甘肃兰州730030; 甘肃省动物细胞工程技术研究中心; 甘肃兰州730030; 西北民族大学生命科学与工程学院; 甘肃兰州730030

摘要：为了实现人源化胰岛素样生长因子Ⅰ（human insulin-like growth factors-Ⅰ,hIGF-Ⅰ）基因在大肠杆菌中的高效表达,了解IGF-Ⅰ基因结构与功能的关系,探索人工制备的hIGF-Ⅰ在临床治疗疾病上的应用,实验参照GenBank中人IGF-Ⅰ氨基酸序列并进行密码子优化,然后人工合成这条基因并将克隆至pUC57载体上.构建重组表达载体pGEX-6P-1-hIGF-Ⅰ,转化大肠杆菌BL21菌株,进行不同诱导条件的优化,SDS-PAGE电泳确定最佳诱导条件,并利用建立hIGF-Ⅰ的间接ELISA检测方法分析表达产物活性.结果表明,获得重组表达载体pGEX-6P-1-hIGF-Ⅰ,并在大肠杆菌中实现与GST蛋白的融合可溶性表达.最佳诱导条件OD600值为0.8、IPTG浓度为0.5 mmol/L,表达蛋白的浓度为2.811 mg/mL,且产物具有抗原活性.说明人工制备的hIGF-Ⅰ与天然的hIGF-Ⅰ生物活性有部分相同,在基础研究和药物开发方面可作为替代物进行研究.

注: 保护知识产权,如需阅读全文请联系西北民族大学学报杂志社