甘蓝型油菜转录因子WRKY72的基因克隆、表达分析及互作蛋白鉴定
摘要：WRKY转录因子作为植物特有的一类转录因子,参与调控生长发育、次级代谢、衰老以及对生物和非生物胁迫的响应等过程。本研究首先利用反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)方法从甘蓝型油菜(Brassica napus)中克隆了WRKY72的cDNA序列(GenBank No.KC246585),其编码蛋白含有1个保守的WRKY结构域和1个C2H2型锌指结构。利用绿色荧光蛋白进行亚细胞定位观察,结果显示BnaWRKY72定位于细胞核。双荧光素酶报告系统检测发现,BnaWRKY72对W-box元件驱动的萤火虫荧光素酶报告基因具有转录激活活性。通过多种激素、生物和非生物逆境处理,利用qRT-PCR检测BnaWRKY72表达量变化,发现该基因能够响应冷害胁迫以及核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)侵染。利用酵母双杂交和双分子荧光互补技术,筛选并验证了BnaWRKY72的多个互作蛋白,包括同亚组的BnaWRKY31、BnaWRKY42及其自身;同时,BnaWRKY72与小分子类泛素修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier, SUMO) 3发生互作,提示SUMO化修饰可能参与其活性调节。本研究首次探讨了BnaWRKY72分子特性,为深入研究其抗逆功能及相关分子机制提供了参考依据。
注: 保护知识产权,如需阅读全文请联系农业生物技术学报杂志社
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