摘要：胰岛素样生长因子1 (insulin-like growth factor-1, IGF-1)是重要的内分泌激素,不仅调控细胞生长和分化,还参与免疫系统调节。为研究鱼类IGF-1在机体抗菌免疫中发挥的作用,探寻IGF-1对鱼类单核巨噬细胞的调控机制,本研究从香鱼(Plecoglossus altivelis)转录组数据中获得PaIGF-1的cDNA序列(GenBank No.MK005188)。序列全长929 bp,包含1个ORF,编码171个氨基酸,预测分子量为18.86 kD。PaIGF-1氨基酸序列相对保守,与大西洋鲑(Salmo salar) IGF-1具有最高的同源性(77%)。qRT-PCR分析显示,PaIGF-1主要在香鱼肝脏、体肾、头肾和肠道中表达;感染鳗弧菌(Vibrio anguillarum)后,脾脏中PaIGF-1表达在感染8 h显著上调,头肾中PaIGF-1表达在感染24 h显著上调,而在鳃和肝中的表达没有改变。利用原核表达系统诱导表达并纯化PaIGF-1重组蛋白(recombinant PaIGF-1, rPaIGF-1),以rPaIGF-1孵育单核巨噬细胞,发现rPaIGF-1可显著增强单核巨噬细胞的吞噬能力,但其杀菌作用不受影响;qRT-PCR分析显示,rPaIGF-1可显著上调单核巨噬细胞中抑炎因子白介素(interleukin, IL)-10和转化生长因子β(transforming growth factor β, TGF-β)的表达,下调促炎因子IL-1β和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α, TNF-α)的表达;最后,利用rPaIGF-1分别孵育单核巨噬细胞PaCXCR (C-X-C chemokine receptor) 3.1^+和PaCXCR3.2^+,发现rPaIGF-1促进PaCXCR3.2^+中PaSTAT3的磷酸化,而对PaCXCR3.1^+中PaSTAT1和PaSTAT3的磷酸化水平没有影响。以特异性siRNA抑制PaSTAT3表达,可显著下调rPaIGF-1处理的PaCXCR3.2^+中IL-10和TGF-β的表达,表明rPaIGF-1可能通过激活PaSTAT3而抑制单核巨噬细胞的炎症水平。本研究为深入探讨香鱼IGF-1在宿主抗菌免疫中发挥作用的机制提供了基础资料。

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