加急见刊

Vasorin蛋白特异单链DNA适配体的筛选与鉴定

李慧; 王玮; 丁红梅; 董洁; 黄皑雪; 罗昭锋; 李洁; 白琛俊; 李少华; 邵宁生 军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所; 北京100850; 中国人民武装警察部队后勤学院生物化学与分子生物学教研室; 天津300309; 中国科学技术大学; 安徽合肥230026

摘要：目的：筛选能特异识别vasorin（VASN）蛋白的单链DNA（ss DNA）适配体并对其进行鉴定。方法：利用SPRSELEX技术筛选VASN蛋白特异ss DNA适配体,通过基因克隆测序、MEME在线软件和RNA structure软件分析富集文库序列并挑选出候选适配体序列,利用EMSA、ELISA、流式细胞术对候选适配体进行特异性与亲和力鉴定。结果：经过5轮SELEX筛选,获得了与VASN蛋白特异结合的ss DNA适配体富集文库,合成候选适配体,经EMSA和ELISA检测分析,证实适配体V4-2能与VASN蛋白特异结合,而不与无关对照牛血清白蛋白结合,其平衡解离常数为281.3±103.7 nmol/L;流式细胞术证实V4-2能够特异识别高表达VASN蛋白的Hep G2细胞。结论：筛选获得特异识别VASN蛋白的ss DNA适配体V4-2。

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