加急见刊

下调Skp2表达抑制骨肉瘤U2OS细胞恶性表型的实验

丁路; 孙荣鑫; 白靖平 新疆医科大学第五附属医院骨一科; 乌鲁木齐830011; 新疆医科大学第六附属医院关节外科; 乌鲁木齐830011; 新疆医科大学附属肿瘤医院骨与软组织肿瘤科; 乌鲁木齐830011

摘要：目的通过使用小干扰RNA(siRNA)降低骨肉瘤中S期激酶相关蛋白2(Skp2)的表达,探讨Skp2对骨肉瘤恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法转染Skp2 siRNA敲低骨肉瘤U2OS细胞中Skp2的表达。通过RT-qPCR和Western blot法检测细胞内Skp2的mRNA和蛋白表达水平,确定Skp2 siRNA的沉默效率。MTT法检测细胞增殖情况,PI单染及Annexin V/PI双染后用流式细胞仪检测对骨肉瘤细胞周期及凋亡的影响。Transwell实验和钙黄绿素乙酰甲酯(Calcein-AM)染色检测细胞的迁移和侵袭。Western blot检测细胞内Skp2的下游基因p21、p27、p-Akt及E-cadherin的表达变化。结果转染Skp2 siRNA在U2OS细胞中获得较高的敲除效率。Skp2表达下调抑制了骨肉瘤细胞的增殖,并且使细胞生长阻滞在G0/G1期,细胞的凋亡率明显增加。抑制Skp2后U2OS细胞的侵袭和迁移能力明显降低。U2OS细胞Skp2敲低后其下游调控分子p21、p27及E-cadherin的表达显著升高,而p-Akt的表达则明显减弱。结论 Skp2在骨肉瘤细胞中发挥癌基因的作用,通过调控其信号通路中p21、p27、p-Akt及E-cadherin的表达影响细胞生长、周期、凋亡、侵袭和迁移能力等恶性生物学行为。

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