贵州医科大学学报杂志文献阅读_三种淀粉样前体蛋白胞外结构域突变体的建立及功能验证

三种淀粉样前体蛋白胞外结构域突变体的建立及功能验证

张鹏; 崔冬冰; 舒莉萍; 范安然贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室; 组织工程与干细胞实验中心; 贵州省再生医学重点实验室; 贵州贵阳550004; 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室; 贵州贵阳550004

摘要：目的:构建3种淀粉样前体蛋白(APP)胞外结构域突变体细胞株并进行功能的初步验证。方法:通过Touch down PCR的方法扩增E1结构域缺失的APP695片段以及E1和信号肽双缺失的片段,采用融合PCR的方法扩增E2结构域缺失的APP695片段,并将获得的片段连接于pCMV-APP695载体中得到APP胞外结构域突变体质粒;质粒转染CHO细胞后,添加G418筛选表达APP胞外结构域突变体的单克隆细胞系;通过Western blot方法检测APP胞外结构域突变体的表达及胞外分泌水平,分析信号肽对该突变体分泌的影响。结果:成功获得了APP的E1结构域突变体、E1/信号肽双缺失突变体以及E2结构域突变体细胞株,且APP突变体可以正常表达和分泌,但是信号肽缺失后APP突变体可以表达、而不能分泌。结论:APP的E1和E2结构域对APP蛋白的胞外分泌无影响。

注: 保护知识产权,如需阅读全文请联系贵州医科大学学报杂志社