生物加工过程杂志文献阅读_3-甾酮-9α-羟基化酶基因的表达及其催化合成9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮

3-甾酮-9α-羟基化酶基因的表达及其催化合成9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮

王康; 吴志革; 赵伟睿; 胡升; 麻菊美; 王进波; 姚善泾; 梅乐和浙江大学宁波理工学院生物与化学工程学院; 浙江宁波315100; 浙江大学化学工程与生物工程学院; 浙江杭州310027; 浙江大学生物系统工程与食品科学学院; 浙江杭州310058

摘要：研究应用于甾体9α-羟基化的高效催化剂和催化体系是实现甾体药物9α位羟基高效合成的关键。本文中,笔者对来源于分支杆菌（Mycobacterium tuberculosis） H37Rv和红平红球菌（Rhodococcus erythropolis） SQ1的3-甾酮-9α-羟基化酶基因（reksh A,mtksh A）进行优化,并对2个基因的催化活性进行检测。通过构建工程表达菌株,以雄甾-4-烯-3,17-二酮（AD）为底物,对制备9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮（9α-OH-AD）的催化反应进行了探索。结果表明：基因序列优化显著提升了ReKshA和MtKshA蛋白的可溶性表达,其中Re Ksh A具有较好的雄甾-4-烯-3,17-二酮9α位羟基化活性。用TB培养基培养Re Ksh A的工程表达菌株BL21（DE3）-pET28a-rekshA-yh,在30℃、500μmol/L底物浓度、0. 8%（体积分数）乙醇为助溶剂、0. 1 mmol/L IPTG诱导浓度、底物与诱导剂同时加入到工程菌液中的条件下,9α-OH-AD得率达到97. 09%。

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