加急见刊

HaV01 Pol内部半胱氨酸对其剪接活性的影响

李佳; 孟清 东华大学生物科学与技术研究所; 上海201620

摘要：希望获得一个内部不含有半胱氨酸的蛋白质内含子作为标记和修饰的工具。通过定点突变和搭桥PCR技术对 HaV01 Pol内部4个半胱氨酸Cys进行突变和替换，然后通过Western Blot检测对应的蛋白质内含子活性。结果发现，位于112位的半胱氨酸突变可以影响 HaV01 Pol的剪接活性，其余3个对其剪接活性则没有任何影响，用甘氨酸Gly和苏氨酸Thr替换112Cys后，可以挽救 HaV01 Pol的剪接活性。第一次发现一个非保守区的半胱氨酸可以决定蛋白质内含子的活性。通过Gly和Thr替换成功获得了2个没有半胱氨酸的 HaV01 Pol蛋白质内含子，为 HaV01 Pol进一步改造和应用奠定了基础。

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