加急见刊

鼠痘病毒环介导等温扩增可视化检测方法的建立

周洁; 陶凌云; 赵丽娟; 胡建华; 高诚 上海实验动物研究中心; 上海201203

摘要：目的应用环介导等温扩增（LAMP）技术建立一种鼠痘病毒（ECTV）的可视化快速检测方法。方法通过序列分析选择3段ECTV序列保守区域设计了9套LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320C仪监测反应进程并筛选最佳引物组合,优化反应条件,建立了对ECTV核酸进行特异性扩增的LAMP检测方法,并可通过加入目测荧光检测试剂肉眼判断结果。对所建立的方法进行了敏感性、特异性评估,并对人工感染样品进行了检测。结果该方法在63℃恒温下作用60 min,ECTV DNA获得了高效特异性扩增,与其余常见小鼠病毒无交叉反应;最低检出量为530 fg/μL,是常规PCR的10~3倍,加入目测荧光染料判断结果与Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致。结论建立的ECTV LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏和操作简单的特点,或具有良好应用前景。

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