弓形虫生物检测靶标miR-191的鉴定
摘要:目的建立弓形虫miRNA探针定量检测法。方法采用高通量测序技术筛选出不同弓形虫虫株间表达量高且差异不明显潜在靶标,并对其不同时间点(0 d、1 d、3 d、5 d、7 d)外周血的表达及诊断效能进行研究。结果高通量测序表明, miR-252、miR-3641、miR-509-5p、miR-1285、miR-140、miR128-1、miR-191、miR-3426具有作为血液中弓形虫生物检测靶标的潜在性。通过对感染弓形虫RH株和M49株小鼠的miR-191诊断效能分析后表明,敏感性分别为85%和95%,特异性均为100%。根据miR-191制备纳米金探针,对不同时间点感染弓形虫RH株和ME49株大鼠的血液靶标miR-191进行定量分析表明,感染后7 d内感染弓形虫miR-191表达情况相对稳定。制作弓形虫RH株、弓形虫ME49株、伯氏疟原虫、约氏疟原虫、隐孢子虫,鼠肝炎病毒和金黄色葡萄球菌感染的小鼠模型,与对照组比较分析表明,miR-191在感染弓形虫RH株和ME49株的小鼠模型中出现高表达,而在感染细菌、病毒和其它寄生虫的小鼠模型中均未出现表达。结论弓形虫miR-191具有作为检测靶标的应用价值。
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