加急见刊

二维电泳分析胎儿酒精综合征斑马鱼模型蛋白表达谱

钱林溪 孙淑娜 蔡威 王跃祥 蒋缪 宋后燕 上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所 200092 复旦大学附属儿科医院 复旦大学分子医学教育部重点实验室

摘要：目的 利用二维电泳分析乙醇诱导斑马鱼胚胎发育畸形的可能分子机制。方法采用400mmol／L乙醇在斑马鱼胚胎圆顶期处理3h，观察乙醇导致的斑马鱼胚胎发育畸形；通过二维凝胶电泳分析受精卵期、圆顶期、胚盾期和5体节期的胚胎总蛋白，采用差减分析法减少母源性蛋白的干扰，比较5-体节期正常对照组和乙醇处理组斑马鱼胚胎蛋白表达谱的改变；通过原位杂交验证二维电泳的分析结果。结果400mmol／L乙醇处理导致62％的胚胎产生体轴发育障碍和60％的胚胎产生独眼畸形。二维电泳分析结果显示，400mmol／L乙醇处理会导致受精后12h（12hourspostfertilization，12hpf）斑马鱼胚胎胶原蛋白2al和TARDNA结合蛋白表达分别下调81％和73％。随后原位杂交显示，胶原蛋白2al在乙醇处理组胚胎体轴的表达明显下调；24hpf乙醇处理胚胎胶原蛋白2al在胚胎体轴的表达水平逐渐恢复正常，但神经管结构受到严重影响。结论乙醇处理后斑马鱼胚胎发育畸形可能是由于乙醇干扰了胚胎发育过程中胶原蛋白2al和TARDNA结合蛋白的表达；其中乙醇对胶原蛋白2al在轴中胚层早期表达的干扰，可能是导致发育后期体轴和神经管畸形的重要原因。

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