加急见刊

稳定表达人乳头瘤病毒16E7蛋白HaCaT细胞株的建立

缪飞 王秀丽 王宏伟 丁蕙琳 吕婷 张玲琳 上海市皮肤病医院 200050

摘要：目的建立稳定表达人乳头瘤病毒（HPV）16E7蛋白的HaCaT细胞株。方法利用PCR及酶切技术扩增出CaSki细胞中HPV16E7基因并定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3．1（＋）中．构建真核表达质粒pcDNA3．1（＋）-HPV16E7。将重组质粒转染人HaCaT细胞，经G418筛选稳定表达HPV16E7蛋白的细胞株并予以鉴定。结果经酶切、测序鉴定构建pcDNA3．1（＋）-HPV16E7成功。RT—PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后检测到HPV16E7mRNA表达的特异性297bp条带；Western印迹可检测到E7蛋白稳定表达。结论成功构建m稳定表达HPV16E7蛋白的HaCaT细胞株。

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