温州医科大学学报杂志文献阅读_利用流式分选技术富集空载质粒转染特定巨噬细胞的方法及条件优化

利用流式分选技术富集空载质粒转染特定巨噬细胞的方法及条件优化

吴昊; 王敏; 罗贤强; 郭建春; 郑斌娇温州医科大学浙江省医学遗传学重点实验室; 浙江温州325035; 温州医科大学Attardi线粒体生物医学研究院

摘要：目的:建立BD FACSAria II流式细胞分选仪富集PX458 空载质粒转染J774A.1 细胞的方法并进行技术优化,确立用于筛选J774A.1细胞的最佳条件。方法:构建PX458空载质粒转染J774A.1细胞株,进行7-AAD染色。选择BD FACSAria II流式细胞分选仪的100 μm喷嘴以及initial、4-way purity、purity、yield、fine tune、single cell 6种分选模式分选J774A.1细胞的GFP阳性转染株,比较仪器各部分参数变化对分选效率的影响。结果:在仪器稳定的液流条件下,100 μm喷嘴各分选模式所得细胞纯度均达80%以上,其中purity模式分选效率最高,达95.7%±1.0%。结论:使用BD FACSAria II流式细胞分选仪100 μm喷嘴分选PX458空载转染的J774A.1细胞选择purity分选模式最合适。

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