介导pcDNA-IGF-1质粒转染骨髓间充质干细胞两种方法比较
摘要：目的比较阳离子聚合物Xfect与PDS-1000基因枪系统转染人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）的转染效率及两种方法对细胞增殖能力的影响。方法应用贴壁法原代培养hBMSCs,取第3代细胞以流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD29、CD34、CD45、CD90,并分别用Xfect与PDS-1000基因枪系统将pcDNA-胰岛素样生长因子1（IGF-1）质粒转导入hBMSCs中。转染后在不同时间点使用倒置荧光显微镜观察绿色荧光,计数阳性细胞,计算细胞转染率及细胞漂浮率;以酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测IGF-1分泌量。结果 hBMSCs培养成功后,高表达CD29、CD90,低表达CD34、CD45。在转染后1、2d,两种方法细胞转染率差异有统计学意义（t=4.734、5.324,P〈0.05）。两种方法转染后细胞IGF-1分泌量均较转染前增加,但两种方法间比较差异有统计学意义（t=2.220-10.678,P〈0.05）。两种方法转染均有部分细胞脱落。结论两种方法均可将pcDNA-IGF-1基因转染入hBMSCs内,转染后细胞能分泌IGF-1。Xfect转染试剂转染效率较高,PDS-1000基因枪系统转染效率较低,两者对细胞都造成一定损伤。
注: 保护知识产权,如需阅读全文请联系青岛大学医学院学报杂志社
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