加急见刊

重组6型腺相关病毒介导的绿色荧光蛋白在野百合碱诱导肺动脉高压大鼠肺组织中的表达

樊勇; 郝燕捷; 高岱; 张卓莉 北京大学第一医院风湿免疫科; 100034

摘要:目的探讨重组6型腺相关病毒(r AAV6)介导的绿色荧光蛋白Zs Green在野百合碱诱导的动脉型肺动脉高压(PAH)大鼠中的转染效果及表达,为进一步利用此病毒载体进行PAH机制研究提供实验依据。方法将24只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为正常对照组、PAH模型组和PAH病毒组,每组8只。PAH模型组和PAH病毒组大鼠颈背部皮下单次注射野百合碱60 mg/kg建立PAH模型,造模后1d PAH病毒组大鼠气管内注射100μl含1×1011vg r AAV6-Zs Green液,PAH模型组大鼠气管内注射等体积PBS,正常对照组大鼠颈背部皮下注射等体积生理盐水,且气管内注射等体积PBS。造模3周后各组大鼠称重,采用右心导管法检测右室收缩压(RVSP)和平均肺动脉压(m PAP)。取大鼠新鲜肺组织制备冰冻切片,采用苏木精伊红染色检查大鼠肺组织病理学改变并计算肺动脉中膜厚度(WT)百分比,采用免疫荧光法观察大鼠肺组织中Zs Green荧光强度变化。收集游离心脏标本测定右心室肥厚指数(RVHI)。采用Western blot法检测各组大鼠肺组织中Zs Green蛋白的表达。结果 PAH模型鼠体重明显低于正常对照组,造模大鼠RVSP、m PAP、RVHI和WT百分比均明显高于正常对照组大鼠,提示野百合碱诱导PAH大鼠造模成功。荧光显微镜下可见PAH病毒组大鼠肺组织中Zs Green平均荧光强度(A值)为33.471±5.147,明显高于正常对照组的4.581±1.871和PAH模型组的4.167±1.249,差异均有统计学意义(均P〈0.05),并在肺组织中呈广泛分布,包括肺血管内中膜。Western blot检测显示,正常对照组、PAH模型组和PAH病毒组大鼠肺组织中Zs Green蛋白相对表达量(灰度值)分别为0.072±0.017、0.067±0.019和0.317±0.062,PAH病毒组大鼠组肺组织Zs Green蛋白相对表达量明显高于正常对照组和PAH模型组,差异有统计学意义(均P〈0.05)。苏木精伊红染色显示,PAH病毒组大鼠肺组织炎性细胞浸

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