北京农学院学报杂志文献阅读_桃果实PpARF1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

桃果实PpARF1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

管丹; 史梦雅; 胡晓; 关伟; 刘悦萍北京农学院植物科学技术学院; 北京102206; 北京农学院生物科学与工程学院/农业部华北都市农业重点实验室; 北京102206; 北京市平谷区人民政府果品办公室; 北京101200

摘要：【目的】为了探讨转录因子ARF1(AuxinResponseFactor)对桃果实发育调控的机制.【方法】以'24号'桃果实为试验材料,构建桃ARF1基因的原核表达载体pET32a-PpARF1,转化到BL21(DE3)中诱导表达菌体蛋白,筛选出重组蛋白的最适表达条件,按照最适条件大量摇菌诱导表达蛋白,并进行重组蛋白的纯化,最后用纯化诱导后的重组蛋白制备多克隆抗体及WB检测.【结果】SDS-PAGE电泳检测得到pET32a-PpARF1重组蛋白的位置大约在95.0kD,在37℃,转速250r/min,IPTG0.10mmol/L,诱导4h,诱导出的蛋白表达量最大.免疫印迹试验显示所得抗血清能很好检测到目的蛋白.【结论】ARF转录因子参与生长素调控桃果实发育成熟的过程.

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