基于日本血吸虫SEA纳米抗体的胶体金免疫层析技术的初步研究
摘要：为建立基于纳米抗体的检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析技术，将已经通过噬菌体文库筛选得到的两株纳米抗体的质粒，在枯草芽孢杆菌中表达，得到具有活性的抗体蛋白（VHH-48、VHH-52）并以NI-NTA亲合层析纯化。以柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液，标记VHH-48和VHH-52抗体蛋白并制备金标垫，分别用日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）和羊抗鼠IgG作为检测线和质控线，确定抗体蛋白的最佳标记pH和最适蛋白浓度。采用抗体双夹心的方法对两株抗体蛋白进行组合，建立胶体金免疫层析方法。以优化的双夹心抗体组合，组装试纸条，进行了灵敏度的测定和血吸虫病人粪检阳性血清的敏感性评估，以并殖吸虫等其他寄生虫感染的血清测定了试纸条的特异性。结果显示，成功表达并获得了纯度较高的纳米抗体。胶体金标记VHH-48和VHH-52抗体的最适蛋白量为14和10μg／mL，最适pH分别需要加入16和12μL体积的0．2mol／LK2CO3，并确定以VHH-52标金和VHH52划线为最佳的抗体双夹心组合。对可溶性虫卵抗原的最低检测量为3．4ng／mL，检测血吸虫病人阳性血清的检出率为2．27％，检测其他寄生虫感染血清结果显示出良好的特异性。本文构建了基于日本血吸虫SEA纳米抗体的胶体金免疫层析试纸条方法，为纳米抗体在血吸虫病快速诊断的应用奠定了一定基础。
注: 保护知识产权,如需阅读全文请联系寄生虫与医学昆虫学报杂志社
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