加急见刊

登革2型病毒E蛋白基因的酵母表达

刘美德; 冀霞; 余张; 杨正国; 罗森; 赵瑞君; 赵彤言 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所; 北京100071; 山西医科大学病原生物学教研室; 太原030001; 贵阳医科大学基础学院; 贵阳550004; 北京市疾病预防控制中心北京市预防医学研究中心; 北京100013

摘要：为研究登革病毒与蚊虫相互作用的分子机制，本研究对DENV-2的E蛋白基因进行了毕赤酵母分泌表达。首先，经RT—PCR方法克隆DENV-2的E蛋白基因，将克隆的基因与表达载体pPICZaB连接以构建表达重组子；并经酶切、PCR、测序筛选实验鉴定正确重组子。然后，重组子经氯化锂法转化毕赤酵母菌KM71H获得转化子；经抗生素、表型鉴定、PCR筛选得到Muts型的多拷贝转化子。最后，经甲醇诱导基因表达，Western—blotting方法鉴定蛋白表达情况及最佳表达时间。本研究对DENV-2的E蛋白成功进行了分泌表达，并且确定其表达最佳发酵时间为96h；为进一步研究登革病毒与蚊虫相互作用的分子机制奠定了基础。

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