加急见刊

埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制剂23的基因克隆表达与多克隆抗体制备

翟慧; 王政艳; 吕清巧; 程金芝; 李世琪; 杨茜; 商正玲; 吴家红 贵州医科大学环境污染与疾病监控省部共建教育部重点实验室贵州医科大学现代病原生物学实验室贵州医科大学基础医学院; 贵阳550025

摘要：埃及伊蚊serpin23（丝氨酸蛋白抑制剂23）在雌蚊唾液腺特异高表达，是蚊虫唾液组分的主要蛋白之一。本文设计特异性引物序列，采用RT—PCR技术扩增获得埃及伊蚊广东电白株serpin23成熟肽序列，构建重组表达质粒pET-28a（＋）-serpin23并测序验证。经IPTG诱导表达、KCl染色、切胶纯化获取了目的蛋白；制备了小鼠特异性抗serpin23蛋白多克隆抗体。结果显示：获得serpin23成熟肽序列，全长1197bp，编码399个氨基酸。等电点pI为6．13，具有serpin结构域和一个功能未知的FAINT结构域。pET-28a（＋）-serpin23重组质粒可表达了大小约为47kDa、以包涵体表达为主的融合蛋白。Western Blot结果证明serpin23重组蛋白可以与抗-His标签和抗-serpin23抗体发生免疫反应，约47kDa处产生特异性条带。本研究成功获得了埃及伊蚊广东电白株serpin23重组表达蛋白和抗serpin23多克隆抗体，为后续功能研究奠定基础。

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