MARCO基因敲除小鼠模型鉴定
摘要：目的通过基因分型、基因测序与蛋白免疫印迹法鉴定MARCO基因敲除小鼠模型。方法将经成簇的规律间隔短回文重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白9（Cas9）技术获得16种碱基敲除的MARCO^-/-亲代C57BL/6小鼠（雌、雄鼠各8只）与MARCO^＋/＋的亲代C57BL/6雌性小鼠（8只）合笼繁殖,获得子一代MARCO^0＋/-小鼠;再以MARCO^0＋/-小鼠自交得到MARCO^-/-足够数量的纯合小鼠。采用基因测序对小鼠基因型进行鉴定,采用蛋白免疫印迹法检测MARCO蛋白相对表达水平。结果经过1年的合笼繁殖,共繁殖5代,有5种敲除不同碱基数（-11、-25、-36、-46、-61 bp）的MARCO^-/-基因型稳定遗传;MARCO^-/-、MARCO^0＋/-、MARCO^＋/＋基因型比例约为1∶2∶1,符合孟德尔遗传定律。以MARCO（-11 bp）为例,共获得子五代（F5代）MARCO^-/-小鼠42只,MARCO^0＋/-小鼠92只,MARCO^＋/＋小鼠48只;上述3种基因型F5代小鼠出生后第4、6和8周的体质量分别比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。与MARCO^＋/＋小鼠和MARCO^-/-（-36 bp）、MARCO^-/-（-61 bp）小鼠比较,MARCO^-/-（-11 bp）和MARCO^-/-（-46 bp）小鼠的MARCO蛋白相对表达水平均下调（P〈0.05）,选择该2种小鼠模型作为MARCO基因敲除小鼠模型。结论成功鉴定MARCO基因敲除小鼠模型,为深入研究MARCO基因在小鼠矽肺纤维化中的作用及调控机制奠定基础。
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