关于青蒿油纳米脂质体制剂对痤疮致病菌的抑制作用

作者：李向阳，朱宇同，王艳芳，符林春，黄真炎，黄进梅，邢基斯，王冠军

【关键词】 青蒿油 摘要：【目的】比较青蒿油纳米脂质体和青蒿油的体外抑菌作用。【方法】通过制备不同浓度的青蒿油和青蒿油纳米脂质体的药物培养基，分别观察其对痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌和糠秕孢子菌的抑菌效应。【结果】青蒿油纳米脂质体的最低有效浓度为0648mg／L，而阳性对照药青蒿油的最低有效浓度为648mg／L，在0648mg／L浓度时仅对金黄色葡萄球菌有抑制作用。【结论】通过纳米脂质体的制备工艺，可以增强青蒿油的抑菌疗效，减少用药量。 关键词：青蒿油纳米脂质体；青蒿／治疗应用；痤疮，寻常／中药疗法； 丙酸杆菌，痤疮／药物作用；葡萄球菌，金黄色／药物作用；真菌／药物作用； 工艺学，制药 痤疮为常见的慢性皮囊皮脂腺炎症性皮肤病，发病率高，90%以上青春期男女可有不同程度的皮损，严重者可引起毁容，15%患者因病情较重需要治疗。其发病主要与激素水平异常、皮脂腺分泌调节紊乱、微生物感染等有关。条件致病菌是产生痤疮的中心环节，皮脂毛囊中存在痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌及糠秕孢子菌三种致病菌。因此，治疗痤疮的药物应该具有抑制三种致病菌的作用。而青蒿油纳米脂质体具有易于粘附，可增加药物的接触面积和接触时间，提高作用部位的药物浓度，增强药效等优点。因此本实验将青蒿油制成纳米脂质体，采用试管药基法观察其对痤疮三种病原菌的抑制作用，并与青蒿油的作用进行比较。 1 材料与方法 11 实验材料 111 药物 青蒿油由四川酉阳制药厂提供，含量为36g／L，批号：20001103，原液为微酸性，不溶于水及酒精，而微溶于吐温80。 112 主要仪器 旋转蒸发仪由上海医科大学仪器厂提供，型号：XW80A；超声波粉碎机由宁波新芝科器研究所生产，型号：JY96Ⅱ；电子光学显微镜由日本奥林巴斯光学工业株式会社提供，型号：CK40SL；恒温培养箱由美国谢尔登公司提供，型号：HS2323。 113 试剂 大豆卵磷脂由广东环凯生物科技公司分装，批号：200106450，纯度82%；脱氧胆酸钠由中国医药集团上海化学试剂公司提供，批号：20010518；氯仿由天津化学试剂有限公司提供，批号：20010808，分析纯；甲醇由天津市四友生物医学技术公司出品，批号：20011108，分析纯。 114 菌种 痤疮丙酸杆酸由北京市药检所提供；金黄色葡萄球菌由北京市药检所提供；糠秕孢子菌由广东省皮肤病防治所提供。 12 实验方法 121 青蒿油纳米脂质体的制备 取大豆卵磷脂275g，脱氧胆酸钠075g，青蒿挥发油18mL，置梨形瓶中，加入氯仿―甲醇(1∶1)溶解；旋转蒸发后除去溶剂，使磷脂等在瓶壁形成均匀的薄膜，然后在烧瓶中加入1539mmol／L氯化钠水溶液至20mL，振摇后即得柔性脂质体粗混悬液，在冰水浴条件下探针式超声5～10min，便可得纳米脂质体胶体溶液［1］，最后在烧瓶中加入1539mmol／L氯化钠水溶液至100mL即可。 122 制备青蒿油纳米脂质体的标准 (1)上述所得溶液放置30min后，没有分层、沉淀；(2)上述溶液，可以通过045μm醋酸纤维膜；(3)在电子光学显微镜高倍镜下观察发现其微小颗粒直径都小于100nm，已基本达到了纳米技术水平(图1)。 123 试管药基法 为测定青蒿油和青蒿油纳米脂质体分别对三种菌的最低抑菌浓度，从药物原液开始，按V青蒿油∶VLB肉汤为1∶100和V青蒿油纳米脂质体∶VLB肉汤为1∶100制成648mg／L的药物混悬液，用无菌的LuriaBertani(LB)肉汤作10倍递减稀释至000648mg／L。 13 实验程序及操作 131 药基制备 取营养琼脂33g，酵母水解物05g，置三角烧瓶中，加蒸馏水100mL，充分混匀，调pH至74，加热至琼脂完全融化后分装，每只试管分装18mL，分别加入各浓度青蒿油或青蒿纳米脂质体02mL，加塞、标记。 132 对照设置 设普通培养基斜面作为对照管。 133 高压灭菌