关于HPLC-ELSD法测定麦冬药材及其提取物中果糖的含量

【摘要】 目的 测定不同产地的川麦冬、浙麦冬药材及麦冬提取物中果糖的含量，为麦冬药材及其提取物的质量控制提供科学依据。方法 采用HPLC-ELSD法测定麦冬药材及提取物中果糖的含量。结果 川麦冬和浙麦冬药材中果糖的含量分别为11.32%～19.96%、3.85%～10.19%，川麦冬和浙麦冬提取物中果糖的含量分别为23.48%～25.82%、21.39%～23.29%。结论 川麦冬药材中果糖的含量明显高于浙麦冬药材，川麦冬提取物中果糖含量与浙麦冬提取物基本一致。

【关键词】 麦冬；麦冬提取物；果糖；含量测定

Abstract：Objective To determine the content of fructose in radix ophiopogonis cropped in Sichuan and Zhejian， and in extracts of radix ophiopogonis. Methods A HPLC-ELSD method was used for determining the content of fructose. Results The content of fructose in radix ophiopogonis cropped in Sichuan and Zhejiang were 11.32%～19.96% and 3.85%～10.19%， respectively. The contents of fructose in extracts of radix ophiopogonis cropped in Sichuan and Zhejiang were 23.48%～25.82% and 21.39%～23.29%， respectively. Conclusion The content of fructose in radix ophiopogonis cropped in Sichuan was higher than that of in Zhejiang. The content of fructose in extracts of radix ophiopogonis cropped in Sichuan was almost the same as that of in Zhejiang.Key words：radix ophiopogonis；extract of radix ophiopogonis；fructose 麦冬为常用中药，来源于百合科植物麦冬Ophiopogon ja ponicus (Thunb.) Ker-Gawl.的干燥块根，具有养阴生津、润肺清心的功能。麦冬是生产多种中成药制剂的原料，麦冬提取物是生产生脉注射液和参麦注射液的中间原料。

麦冬药材及麦冬提取物主含甾体皂苷类、高异黄酮类和糖类化合物。目前，关于麦冬药材质量控制的研究报道主要是控制麦冬皂苷D或B的含量，未见关于果糖的含量测定报道。尽管尚未证实果糖是麦冬药材及其制剂的主要有效成分，但由于果糖是麦冬药材及相关制剂中的主要化学成分之一，其含量远高于目前已知麦冬药材中的各种有效成分，因此，测定麦冬药材及含麦冬的中成药中果糖的含量，有利于生产者和使用者更多地了解相关产品中的组成成分，达到放心用药的目的。

1 仪器与试药

Agilent-1100高效液相色谱仪，四元泵，自动进样器，柱温箱，DAD二极管阵列检测器，Agilent A10.02工作站。Alltech 2000ES型蒸发光散射检测器(简称ELSD)。

果糖对照品购于中国药品生物制品检定所，为含量测定用；麦冬药材采自浙江省慈溪县和四川省三台县。乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Inertsil-NH2(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(78∶22)；流速：1 mL/min；柱温：30 ℃；ELSD检测器气流速度2.2 L/min，漂移管温度85 ℃。

2.2 供试品溶液的制备

2.2.1 麦冬药材供试品溶液的制备

取麦冬药材细粉适量(川麦冬约0.3 g，浙麦冬约0.5 g)，精密称定，置50 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，冷浸24 h，期间振摇数次，滤过，精密量取 5 mL，置10 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，制得供试品溶液，微孔滤膜滤过，取续滤液，备用。

2.2.2 麦冬提取物供试品溶液的制备

取麦冬药材500 g，照部颁标准生脉注射液[1]中麦冬的处理方法，用水煎煮3次，每次40 min，用水量分别为8、6、4倍，水煎液合并、滤过、浓缩，用乙醇沉淀2次，分别使含醇量达70%、85%，醇沉液浓缩成稠膏，得麦冬提取物(流浸膏)。取麦冬提取物0.25 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，振摇使完全溶解，制得麦冬提取物供试品溶液，微孔滤膜滤过，取续滤液，备用。

2.3 系统适应性

在上述色谱条件下测定，结果表明，理论塔板数以果糖峰计算为5 900(见图1)。

2.4 线性关系考察

精密称取果糖适量，加70%乙醇制成每1 mL含果糖1.484 mg的对照品溶液。精密吸取0.5、1、2、3、4、5 mL，分别置10 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，制成系列对照品溶液。按上述色谱条件进样10 μL，以进样量的自然对数(lnW)为横坐标，峰面积的自然对数(lnA)为纵坐标计算，得果糖的回归方程为：lnA= 1.308 6lnW+7.946 4，r=0.999 6，线性范围为0.728～7.280 μg。

2.5 精密度试验

取含量为0.296 8 mg/mL的果糖对照品溶液，连续进样5次，每次10 μL，以果糖的峰面积计算进样精密度，RSD为1.24%。

2.6 重复性试验

取1号麦冬药材细粉，按供试品溶液制备方法制备5份供试液，依法测定，计算得果糖平均含量为18.46%(RSD=1.06%)。

2.7 稳定性试验

取同一份麦冬药材供试品溶液，每隔2 h进样测定，结果5次测定果糖的峰面积基本不变，RSD为0.96 %，表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.8 加样回收率试验

(见表1)表1 果糖加样回收率试验结果(略) 取已测定含量的1号麦冬药材细粉0.25 g，5份，精密称定，分别置50 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，冷浸24 h，期间振摇数次，滤过，分别精密量取5 mL，置25 mL量瓶中，分别加入含果糖1.21 mg/mL的对照品溶液4 mL，再加70%乙醇至刻度，冷浸24 h，期间振摇数次，制得供试品溶液，微孔滤膜滤过，取续滤液，分别进样，计算果糖的平均回收率，结果为99.20%(RSD= 0.52%)。

2.9 样品测定

取麦冬药材细粉和麦冬提取物，按2.2项下操作制备供试品溶液，按上述色谱条件测定含量，结果见表2、表3。表2 麦冬药材中果糖含量测定结果(略)注：1～10为四川省三台县，11～20为浙江省慈溪县。表3 麦冬提取物中果糖含量测定结果(略)

3 讨论

在实验过程中，曾经用木糖、果糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、蔗糖和乳糖为对照品，进行HPLC检测，结果表明，在供试品的色谱图中，除在与果糖保留时间对应的位置检测到明显的色谱峰外，在与木糖、鼠李糖、阿拉伯糖和乳糖保留时间对应的位置未检测到色谱峰，在保留时间与葡萄糖和蔗糖对应的位置仅分别检测到一个很小的色谱峰，说明麦冬药材中的单糖与二糖是以果糖为主要组成成分。实验结果表明，麦冬中果糖的含量高达药材总重的20%。

尽管川麦冬药材中果糖的含量远高于浙麦冬药材，但由于用两种药材生产提取物的得率不一致，川麦冬提取物的得率约为浙麦冬提取物的1.5～2.5倍，因此，两种提取物中果糖的含量基本接近。 本研究用HPLC-ELSD方法测定了麦冬提取物中21.39%～25.82%的化学成分含量，结果可以为含麦冬的中药注射剂的质量控制提供有用的控制参数。本测定方法也可以为其他中药注射剂的质量控制提供参考。