马齿苋有效成分的提取及定量分析

作者：周春丽， 苏虎， 王德解， 李玉萍

【摘要】 目的提取马齿苋中多糖、生物碱、多不饱和脂肪酸和黄酮有效成分及定量，为研制治疗糖尿病的功能性食品提供依据。方法分别采用不同有机溶剂提取方法提取有效成分。结果几种有效物质的含量由大到小依次为多糖、生物碱、黄酮、多不饱和脂肪酸。结论南昌地区马齿苋中含有以上4种有效成分且生物碱含量比其他地区稍高。

【关键词】 马齿苋 有效成分 提取

Abstract：ObjectiveTo extract and determine the contents active ingredients from polysaccharide， alkaloids， flavonoid material and polyunsaturated fatty acid of Portulace oleracea L. MethodsThe active ingredients were extracted in different organ solvent respectively. ResultsThe result showed that several active ingredients content existed in Rortulace olercaeal. The content order was subsequently polysaccharide， alkaloids， flavoinvid material， and polyunsaturated fatty acid. ConclusionThe result shows that four active ingredients really exist in Portulace oleracea L. in Nanchang and alkaloids in Nanchang are higher than the ones in other area.

Key words：Portulace oleracea L.; Active ingredients; Extraction 马齿苋Portulaca oleracea L.属马齿苋科(Portulacaceae)，一年生肉质草本植物，是我国古老的菜药兼用植物，在我国大部分地区均有分布，又名长命菜、五行草、瓜子菜、麻绳菜、五色苋、马食菜等。马齿苋以其丰富的营养、独特的药理作用以及菜药兼用特性，早已被民间广泛应用于治疗热毒血痢、痈肿、疔疮、蛇虫咬伤和便血等疾病［1，2］，日益受到广泛的研究。现代科学研究也表明，马齿苋含有大量维生素、矿物质、不饱和脂肪酸、微量元素和丰富的柠檬酸、苹果酸、氨基酸、去甲肾上腺素、多巴胺、强心苷、蒽醌类、香豆素、黄酮、生物碱等多种活性成分［3～5］，具有降血脂、降血糖、抗衰老、消炎抑菌、增强免疫等多种保健功能和疾病治疗作用［5～7］，被国家卫生部认定为药食同源的保健功能食品之一，具有广阔的开发前景。本实验对马齿苋有效成分进行提取和定量分析，以期为治疗糖尿病的功能性食品的研制提供依据。

1 器材与方法

1.1 仪器与试剂

LAMBDA 35 型紫外分光光度计，Heraeus 烘箱，Philips Comfort粉碎机，SORVALL Evolution RC型离心机，磁力搅拌器（SI VORTEX），通风橱，安捷伦6820型气相色谱、旋转蒸发仪(RE-52AA)。 石油醚，氢氧化钾，无水乙醇，尿素，10%硫酸，氨水，无水乙醇，氯仿均为国产分析纯。

1.2 材料马齿苋采自江西南昌一带，将其于烘箱中在60℃烘干至恒重，粉碎，密封备用。

1.3 步骤

1.3.1 马齿苋多糖的提取葡萄糖标准曲线的制作：蒽酮硫酸法测定糖含量，标准曲线方程：Y=0.584 3X+0.010 3(R2=0.997 1)。

马齿苋多糖的提取和测定［8］：准确称取马齿苋粉末100 g，按照1:30(W:V)加入蒸馏水，水煎煮3次（1.5，1.0，0.5 h），过滤，合并3次提取液，浓缩提取液，冷却后4 000 r/min离心15 min，取上清，以无水乙醇调制终浓度为75%，4℃静置过夜，沉淀物再分别以无水乙醇、丙酮、乙醚回流洗涤，得灰白色粗多糖粉末，以适量蒸馏水溶解粉末，置4℃冰箱备用。

1.3.2 马齿苋多不饱和脂肪酸的提取亚麻酸甲酯标准曲线的制作：利用安捷伦6820型气相色谱制作标准曲线，采取标准品内标法。气相色谱条件：前进样口温度220℃，前检测器温度300℃，后检测器温度275℃，柱温150℃保持时间1 min，以15℃/min升温至200℃，以2℃/min升温至250℃，保持5 min。载气（N2）20ml/min，辅助气（H2）30 ml/min，空气（助燃气）350 ml/min，进样量1μl。标准曲线方程：Y=2 196.9X+1 305.4(R2=0.981 6)。 马齿苋不饱和脂肪酸的提取和测定［9，10］：称取马齿苋干粉100 g，按1∶4的体积比例加入400 ml石油醚，室温搅拌2 h，4 000 r/min，4℃离心15 min，取上清液，挥发尽石油醚，得黏稠状褐色油状物，称重，称取1/4倍于油状物的KOH，以3∶80（W/V）的比例溶于无水乙醇中。加至油状物中，搅拌，皂化反应45 min。再在4℃反应60 min。过滤，得透明溶液，浓缩回收乙醇，使乙醇含量不大于50%。加入等体积的蒸馏水，用浓盐酸调至出现分层（pH 2.0左右）为止，取上层油相。70℃水浴制备含有一定比例（20%）尿素的乙醇溶液。按2.4倍滤液体积的比例加入油相中，70℃水浴搅拌使溶液呈均匀的透明相。置4℃冰箱放置6h，过滤或离心除去包合物，浓缩回收乙醇。加入4倍于油状物的蒸馏水稀释，用1/3倍体积的氯仿萃取3次，挥发氯仿，得浓缩的多不饱和脂肪酸。

1.3.3 马齿苋生物碱的提取［11］称取100 g马齿苋粉末，加500 ml无水乙醇，40℃搅拌1 h。过滤，收集滤液，滤渣中加300 ml的无水乙醇，40℃搅拌1.5 h。过滤，收集滤液，滤渣中加300 ml的无水乙醇，40℃搅拌30 min。过滤，收集滤液，合并以上3次滤液。置旋转蒸发仪中挥发尽乙醇，出现黑色浸膏。在浸膏中加50 ml 10%的硫酸溶解，过滤。用氨水调pH至10.0，加入10ml 饱和NaCl（36 g NaCl / 100 g）水溶液。用1/5倍体积于原溶液的氯仿萃取5次，置通风厨中将氯仿挥发尽，10%乙醇溶解。

1.3.4 马齿苋黄酮的提取

黄酮标准曲线的制作［12］：标准曲线方程：Y=0.632 7X－0.000 5(R2=0.998 2)。

马齿苋黄酮的提取：取提取多不饱和脂肪酸后的残渣约100 g，加75%乙醇400 ml，常搅拌1.5 h。4 000 r/min，室温离心15 min。减压浓缩至125 ml（1.25倍于残渣的量）后，用去离子水稀释6倍。按1/50（W/V）的比例加入NaCl，静置2 d，会有絮状残渣析出。过滤，取上清液，挥发乙醇。用乙醚萃取后，在通风厨中挥发尽乙醚，将出现黄色结晶。结晶用水加热溶解，-20℃保存备用。

1.3.5 马齿苋总提取物的提取称取马齿苋粉末20 g［按1∶50（w/v）的比例分3次加水］。先加400 ml蒸馏水，煮沸搅拌1h，过滤或离心，取上清液。剩余残渣再重复提取两次。合并3次提取液，即为总提取液。

2 结果

见表1。表1 马齿苋各成分提取条件及其得率（略）

由表1可见，马齿苋各有效成分含量高低为多糖＞生物碱＞黄酮＞不饱和脂肪酸。首先，影响多糖提取得因素很多，如温度、料液比、提取时间是较为显著的3个影响因素。

3 讨论

本文多糖提取条件是根据前人研究马齿苋多糖提取时优选的条件［8，13，14］，并加以改进。其次，在提取马齿苋多不饱和脂肪酸时，需注意两个关键环节：①用浓盐酸调pH到2～3时需谨慎，盐酸一旦过量，就会打破上下两层之间的分界面，从而难以分离出上层油层。②做尿素包合实验时，需配制一定比例的尿素乙醇溶液，若比例不合适将导致尿素析出，起不到尿素包合饱和脂肪酸的效果。在本实验中使用乙醇与尿素的比例，其比值（ml/g）为3。此比值和提取华山松籽油所用比值一致［9］。马齿苋富含ω－3不饱和脂肪酸，郭志峰等［15］测定马齿苋全草中以亚麻酸(47.16%)、亚油酸(22.00%)及棕榈酸(17.40%)为主，籽中以亚油酸(45.86%)及亚麻酸(30.16%)为主。邹耀洪［16］采用2-氨基-2-甲基丙醇化学改良气相色谱一质谱法分析鉴定出了马齿苋的10种脂肪酸，是由C16－C22 脂肪酸组成，多不饱和脂肪酸总相对含量为70.64%，其中9，12，15-十八碳三烯酸(亚麻酸)相对含量达50.08%，还检出了植物中极少见的5，8，11，14，17-二十碳五烯酸(EPA)和4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸(DHA) 。

本实验以亚麻酸作为标准品，通过气相色谱测量样品，发现样品和标准品的峰面积明显高于标准品的峰面积，从而肯定本马齿苋菜中含有亚麻酸。生物类黄酮是其活性成分之一，它具有降血糖、降血脂、抗心律失常等四十多种生理活性。本文采用乙醇作为提取试剂，与其他有机溶剂相比，乙醇无毒，成本低。这和从其他多数植物中提取黄酮类物质所用有机溶剂是一致的［12，17，18］。生物碱是一类含氮的碱性有机化合物，大都具有特殊而显著的生理活性和毒性，是中草药中重要的有效成分之一［19］。王仲英等［20］测定了太原地区马齿苋中的生物碱含量为21.9 mg·kg-1，而本文测定南昌地区马齿苋中的生物碱含量为60.80 mg·(100 g)-1，可见南昌地区马齿苋中的生物碱含量比太原地区的高。

现代医学实验也证明，马齿苋含有多种功能因子，对人体有着各种保健及疾病治疗作用，它主要有降血脂、降血糖、抗衰老、消炎抑菌、增强免疫等多种功效。本实验的目的是证实南昌地区马齿苋中几种有效成分的存在和含量，为研制治疗糖尿病的功能性食品提供依据。

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