石斛治疗实验性大鼠萎缩性胃炎的医学研究

作者：潘小炎，李天资，周喜汉，尹毅霞，潘兴寿

【摘要】 目的 探讨石斛治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)的疗效及其机制。方法 用氨水、乙醇和去氧胆酸钠灌胃法，制成大鼠CAG模型。造模后治疗组以石斛治疗5周，观察血胃泌素（GAS）、生长抑素（SS）和胃黏膜前列腺素E2（PGE2）的变化情况，并与模型组和对照组比较。结果 石斛治疗组治疗前SS 、GAS和PGE2分别为7.95±2.14 ng/L，216.13±77.21 ng/L，1435.10±200.53 pg/mp，均较对照组低（P＜0.01），治疗后分别为9.58±1.01 ng/L，328.53±84.74 ng/L，1715.66±125.49 pg/mp；治疗后除SS外，各观察指标水平均较治疗前高（P＜0.01），与对照组比较差异不大(P＞0.05)。结论 石斛可使GAS和 PGE2增多，对CAG有良好的治疗作用。

【关键词】 萎缩性胃炎;石斛;大鼠

【Abstract】Objective To study the effect and mechanism of dendrobium for treatment of chronic atrophic gastritis(CAG).Methods The rat of CAG model was made by pouring ammonia water，alchol and sodium deoxycholate into stomach. The treatment group were given dendrobium for five weeks. The blood gastrin(GAS)，somato statin(SS) and prostaglandin E2(PGE2) were observed.They were compared with control group.Results the SS，GAS and PGE2 in treatment group were 7.95±2.14(ng/l)，216.3±77.21(ng/l)and1435.10±200.53(ng/l)respectively before treatment，which were lower than those in control group(P＜0.01).the SS，GAS and PGE2 in therapy group were 9.58±1.01(ng/l)，328.53±84.74(ng/l)and1715.66±125.49(ng/l) respectively after the treatment.All the standers were higher after the treatment except the SS（P＜0.01），while there is no difference between the treatment group and control group(P＞0.05).Conclusion The dendrobium can increase the level of GAS and PGE2.it is effective to the treatment of CAG.

【Key words】chronic atrophic gastritis;dendrobium;rat 慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis，CAG)因其与胃癌有密切的关联，同时其确切病因和发病机制迄今为止尚不完全清楚，因而备受各界关注［1］。我院用石斛治疗CAG效果不错，为进一步明确其作用机制，用石斛对复制大鼠CAG模型进行实验性治疗研究，结果如下。

材料与方法

1.动物及分组

采用2 m±2 d龄，体重200±10 g，一级质量标准的雌性远交系Wistar大鼠，由广西医科大学实验动物研究所提供。购回后采用架式笼养，室温为20±2℃，湿度50%～60%，光照明暗各12 h交替，单独空调。先在动物室饲养4 d后随机分为对照组、模型组、石斛治疗组3组，分笼喂养，每组一笼，每笼25只。

2.实验用药物及试制

氨水：中国瓶窑医药化工试制厂，批号20060431，现用现配成浓度0.1%氨水；乙醇：纯度＞99.5%，宜兴市钮家化工助剂厂，批号20060113，现用现配成60%乙醇溶液；去氧胆酸钠：Serva公司生产，上海化学试制采购供应站进口分装经销，批号2005618，现用现配成20 mmol/L溶液；石斛煎剂：石斛300 g加水2000 ml于陶瓷皿慢火煎60分钟，过滤备用。

3.实验方法

①对照组：不造模，灌服生理盐水；②模型组和石斛治疗组：用0.1%氨水作为饮用水自由饮用；20 mmol的去氧胆酸钠溶液每日灌胃一次，每次2 ml；60%的乙醇每周空腹灌胃2次，每次2 ml。上述三因素共处理16周建立鼠CAG模型；对照组用生理盐水灌胃， 每只5 ml，每日1次， 连续5周。实验进行至16周(治疗前)每组取11只大鼠处死；取标本备检，对照组鼠胃病检无明确病态表现，模型组和石斛治疗组鼠胃病检均符合慢性萎缩性胃炎表现，表示造模成功。③模型组停止造模，灌服生理盐水，石斛治疗组也停止造模，每日每只大鼠灌服石斛水煎剂5 ml，连续5周。

4.标本及化验试制

胃泌素（GAS）酶联免疫试剂盒，美国Lifkey公司生产；生长抑素（SS）、胃黏膜前列腺素E2（PGE2）放免试剂盒，第二军医大学神经生物学教研室提供。

5.检测方法

①血清GAS含量检测:采用ELISA法，将受实验的大鼠断头处死，取颈动脉血5 ml(分为2管，各2.5 ml，另一管加1 g/l肝素25 μl抗凝和抑肽酶1250 U用作血浆SS检测)，将1管1500 r/min离心5 rain取10 μl血清，分别加入包被好抗原的96孔酶标板的孔板中，每孔中加入GAS抗体50 μl和POD(缓冲液)50 μl，轻轻混匀30 s，封住盖板，室温孵育45 min，弃除混合物，PBS洗涤5次，甩尽板内液体，用吸水纸拍干，加入100 μl的TMB(酶底物)，轻轻混匀10 s，室温孵育20 min，加入100 μl终止液，混匀30 s后，在酶标仪450 nm波长下，测A值，计算血清中GAS含量。②血浆SS含量检测：采用RIA法，将加入肝素和抑肽酶的全血离心，取血浆。在试管上分别标上管号，标准品管中各加入100 μl不同浓度的标准品，实验管中各加入300 μl待测血浆；所有管中分别加入SS抗血清100 μl和缓冲液200 μl，4℃孵育24 h后，分别加入125IAVP 100 μl混匀，再次4℃孵育24 h，加分离剂500 μl，混匀，室温放置45 min后，4000 r/min离心，20 min，弃上清液，上放免计数仪测定cpm值，由放免数据处理系统绘制标准曲线并计算SS含量。③胃黏膜前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）的测定方法：取出鼠胃，迅速刮取胃黏膜，于液氮中速冻，称重后，放入匀浆器中，加无水乙醇 0.4 ml，轻研磨后，再加入生理盐水 1.6 ml，研磨制成匀浆，离心10 min(3500 r/rain)，取上清液，放-30℃冰箱保存备检。

6.统计学处理

计量资料用均数±标准差（-±s）表示，运用SPSS12.0统计软件包进行检验，三组资料比较用F检验，两两比较用LSD检验，P＜0.05为差异有显著性意义。

结 果

各组大鼠治疗前后各观察指标变化情况，石斛组治疗前后GAS和PGE2均有下降（P＜0.01），SS治疗后较治疗前有上升，但无统计学意义（P＞0.05），模型组治疗前后GAS和PGE2均有下降但无统计学意义（P＞0.05），对照组治疗前后SS、GAS和PGE2变化不大（P＞0.05），GAS和PGE2石斛组治疗后与模型组治疗后和对照组治疗后比较均有显著性差异（P＜0.01），见表1。SS石斛组治疗后与对照组治疗后比较差异无显著性（P＞0.05）。表1 各组体液水平检测结果比较(略)注：与对照组比较，※P＜0.01;治疗前后比较，＃P＜0.01与模型组比较，△P＜0.01

讨 论

胃黏膜是前列腺素的主要合成场所之一，其中PGE2是其重要的一种，后者有很强的抑制胃酸胃蛋白酶原分泌、刺激黏液和碳酸氢盐分泌、增加黏膜血流和促使上皮再生等作用，又有增强黏膜抵抗力的作用(细胞保护作用)。PGE2的细胞保护作用与改善胃黏膜血流有关。 PGE2可保持胃黏膜微血管的完整性，减少血管充血，使完好的胃小凹细胞快速移行，修复破坏了的上皮。PGE2对胃黏膜损伤有较好的保护作用，而提高胃黏膜保护能力又具有一定的防治胃癌前病变和胃癌的作用，大量的研究表明，对胃黏膜的保护作用是通过提高内源性 PGE2的含量来实现的［2］。GAS是胃酸分泌的主要调节激素，其分子量2100，是含有17个氨基酸的多肽，GAS分泌受胃内pH、进食、胃内压变化、SS和其他胃肠激素及交感神经兴奋等诸多因素的影响，同时GAS分泌又可引起近端胃舒张、胃窦收缩的作用。而SS是一种对外分泌、内分泌、旁分泌及自分泌均起作用的调节肽，对消化系统的生物学作用主要是抑制胃泌素等各种胃肠激素的分泌，亦可抑制胃肠运动和黏膜细胞的增生，减少胃肠道壁血流量，抑制胃酸、胃蛋白酶、胰液分泌。GAS可直接刺激SS分泌，而SS又可抑制GAS的分泌，二者间具有独特的区域性调节作用［3～4］。近年来对GAS、SS和PGE2在模型动物或患者外周血中含量水平高低有不同的认识，不但其研究结果报道不一致，而且对其在外周血中的含量变化与CAG的关系也有不同的认识［2～5］。我们的研究结果表明，CAG大鼠SS、GAS和PGE2水平均有下降(P＜0.01);而且从模型组实验结果来看，由于不给予治疗药物，结果大鼠仍维持CAG的病理状态。

CAG是消化系统常见病，其胃黏膜上皮遭到反复损害后导致固有腺体的减少或消失。CAG属中医的“胃痛”、“痞满”范畴，由于其发病日久，多种致病因素长期损害，病变渐呈复杂化;或因饮食、情志、劳倦、外邪等因素影响反复发作，故常兼见脾阳虚或胃阴亏之证，或有兼热夹湿;而气滞血瘀、热郁湿阻又可蕴结成毒。这些总的形成了CAG的本虚标实、虚实夹杂的病机，因此，对CAG的治疗要针对病因，且标本同治。本实验用单味中药石斛制成水煎剂对CAG大鼠进行实验性治疗。其具有益气健脾、理气活血，兼以补脾阳益胃阴、清胃热祛瘀毒等功效，从而标本兼治，虚实共调，恰中CAG的病机。从现代药理学分析，本方诸药有调节免疫功能、改善胃黏膜血液循环、清除自由基及抑制组织细胞癌变的作用［6，7］。本实验可以证实，石斛具有使CAG大鼠前列腺素和胃泌素明显增高之功效。由此可以推测石斛对慢性萎缩性胃炎有修复和促进其康复之功效。