关于不同来源白头翁药材的皂苷含量比较
佚名 2011-05-09
作者：时维静，胡跃进，王海侠，谭志静
【摘要】 目的 以白头翁皂苷B4作为指标，考察不同来源白头翁的质量，为白头翁的加工和选用提供参考。方法 采用高效液相色谱法，对购自亳州中药材大市场白头翁药材与饮片5个样品和滁州野生白头翁进行含量测定。结果 在0.312 5～10 μg范围内线性关系良好，回归方程Y＝276 350X－12 180，R2＝0.999 6。结论 不同来源的白头翁药材皂苷B4含量差异较大。
【关键词】 白头翁；产地；白头翁皂苷B4；含量测定；高效液相色谱法
Key words：Pulsatilla chinensis；original place pulchinenoside B4；content determination；HPLC 白头翁为毛茛科植物白头翁Pulsatilla chinensis(Bge.) Regel的干燥根[1]，为多年生草本植物，具有清热解毒、凉血止痢、燥湿杀虫的功效。目前市场上以野生采集品为主，由于产 地不一，加工和饮片的切制方法不同，对有效成分的含量影响较大。本试验从亳州中药材大市场不同的摊位购白头翁药材3种、饮片2种，采集滁州凤阳九华山野生白头翁，计6个样品。以白头翁皂苷B4为对照品，采用高效液相色谱法测定其含量，为白头翁的加工和选用提供参考。
1 材料
美国Waters 1525型高效液相色谱仪，2487 DAD紫外检测器，Breeze色谱工作站(美国Waters)；TU-1810SPC紫外可见分光光度计(北京普析通用有限公司)；BS21S精密电子天平(德国赛多利斯天平有限公司)。白头翁皂苷B4，暨南大学叶文才教授惠赠。乙腈、甲醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 白头翁样品的采集
市场样品采集于2006年9月，在亳州中药材大市场不同的摊位购白头翁药材A、B、C 3种及饮片D、E 2种。A产地长春；B产地河南；C产地安徽；D购自亳州京皖饮片厂，产地内蒙古；E购于亳州中信饮片厂，产地安徽。
滁州凤阳九华山白头翁于2006年8月采集，清水洗净，拭干，立即置105 ℃干燥箱杀酶5 min，取出，待温度降至50 ℃，再放入干燥箱中烘干，编号为F。
2.2 白头翁皂苷B4含量测定
2.2.1 检测波长的确定
取白头翁对照品溶液，以甲醇溶液作空白基线，在400～190 nm波长范围内扫描。结果表明，白头翁皂苷B4在205 nm波长处有最大吸收，甲醇溶液对样品的测定无干扰。
2.2.2 色谱条件
固定相：ZORBAX SB-C18柱(4.6 mm×150 mm， 5 μm)；流动相：乙腈-水(28∶72)；体积流量1.0 mL/min；检测波长205 nm；柱温：室温。
2.2.3 标准曲线的制作
称取5.0 mg白头翁皂苷B4置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇均，即得0.5 mg/mL浓度的白头翁皂苷B4溶液，取5 mL置10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度得0.25 mg/mL，依次类推，进行倍比稀释得0.125、0.625、0.031 2、0.015 6 mg/mL 6个梯度浓度的对照品溶液，进样量20 μL。以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y＝276 350X－12 180，R2＝0.999 6。白头翁皂苷B4在0.312 5～10 μg范围线性关系良好。
2.2.4 供试品溶液的制备 精密称定各样品白头翁粗粉20.0 g，置圆底烧瓶中，加95%乙醇溶液100 mL回流提取2 h，提取3次，过滤，静置12 h。回收乙醇浓缩至20 mL，取1 mL放入100 mL的容量瓶中，加甲醇定容至刻度，即每毫升溶液相当于0.01原药材。于0.45 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
2.2.5 系统适用性考察
在上述色谱条件下，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定。结果表明，供试品中白头翁皂苷B4与其相邻峰的分离好，保留时间适中(近8 min)。结果见图1。
2.2.6 精密度试验
精密吸取对照品溶液20 μL，注入液相色谱仪中，平行测定5次，在上述色谱条件下测定，对照品峰面积的RSD＝0.72%。结果表明精密度良好。
2.2.7 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液20 μL，注入色谱仪中，在上述色谱条件下，于0、2、4、6、8、12、24 h范围内测定，结果表明，供试品溶液在24 h内稳定性良好，供试品白头翁皂苷B4峰面积RSD＝1.20%。
2.2.8 重复性试验
取滁州凤阳白头翁100 g，粉碎、混匀。分为5份(各20 g)，照供试品溶液制备项下操作，制成供试品溶液，在上述色谱条件下测其白头翁皂苷B4的峰面积，RSD＝0.80%，表明重复性良好。
2.2.9 回收率试验
精密称取已知皂苷B4含量的样品0.50 g，分别加入皂苷B4对照品适量，依供试品溶液的制备方法处理成5份，按上述色谱条件进样分析。回收率(n＝5)为99.5%，RSD＝1.10%。
2.3 不同来源白头翁皂苷B4含量比较
(见表1)表1 不同来源白头翁皂苷B4含量测定结果（略）
3 讨论 地理环境和气候条件是有效成分积累的基础[2]，所以，来源于不同地区的白头翁药材，白头翁皂苷B4含量有一定的差异。样品C、E、F产地均为安徽，为什么含量相差如此之大？经我们多年研究表明，一是白头翁为多年生草本植物，不同的采收时间对其含量有影响；二是白头翁在干燥过程中存在酶解现象，所以杀酶后再50 ℃干燥，其含量较高；三是白头翁皂苷为水溶性物质，饮片切制过程中润洗不当可导致其丧失，故饮片中其含量较低。
中药材和饮片是中药质量源头，其真伪优劣直接影响到中成药的质量，也关系到中医临床疗效和患者的用药安全[3]。有效成分的含量与产地、采收时间及加工方法密切相关。本试验采用高效液相色谱法，通过比较不同来源白头翁其皂苷B4的含量，为白头翁药材的选用与加工提供了科学数据。
【参考文献】 1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.68. [2] 盛明智.中药饮片质量应从产地抓起[J].现代医药卫生，2006，22(19)：3003－3004. [3] 易东阳，胡玉彬.中药行业应加强产地加工的研究与教育[J].卫生职业教育，2004，22(2)：22－23.
