丹参药材中丹参酮ⅡA含量测定方法改进

作者：靳维荣，孙强，单成钢，王志芬

【摘要】 目的对丹参药材中丹参酮ⅡA含量测定方法(药典方法和改进方法)进行对比研究分析，确定改进方法的可行性和优越性。方法在原高效液相色谱( HPLC)法的基础上，通过改变流动相的配比关系，对原药典测定方法作出改进，并将测定结果与药典方法测定结果进行比较。结果①采用改进后的测定方法，色谱峰峰形好，丹参酮ⅡA主峰和其它峰分离度及拖尾因子符合要求;②同一批次丹参的丹参酮ⅡA含量测定结果表明两种测定方法无显著性差异(P>0.05);同时，改进的测定方法可以将测定时间大大缩短，节约流动相。结论改进后的方法重现性好，测定结果准确可靠，节约检测时间和流动相，降低检验成本，是值得推荐的一种替代方法。

【关键词】 复方丹参片; 丹参酮ⅡA; 测定方法; 改进

丹参是临床上广泛使用的祛瘀止痛，活血通经，清心除烦的药材，《中国药典》2005年版Ⅰ部采用高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA含量。在实际检测工作中发现采药典方法中的以甲醇-水(73∶27)流动相，流速1 ml·min-1时，丹参酮ⅡA保留时间在21 min左右，出峰时间较晚，浪费流动相和检测时间。为此，我们对丹参中丹参酮ⅡA含量测定方法的流动相进行了改进。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪，Agilent DAD检测器，Agilent Chemstation工作站(美国安捷伦科技公司)。照品：丹参酮ⅡA(中国药品生物制品检定所，批号：110766 -200416);丹参药材(市场采购);甲醇为色谱纯 (天津市科密欧化学试剂开发中心);水为重蒸馏水;其余试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 药典测定方法[1]色谱柱为Phenomenex Prodigy ODS3-C18色谱柱(4.60 mm×250 mm，5 μm);流动相为甲醇-水(73∶27);检测波长270 nm，流速1.0 ml·min-1，柱温为室温。

2.2 改进的测定方法在药典测定方法基础上，改变流动相为：甲醇-水(80∶20)，其余和药典方法相同。

2.3 供试样品溶液的制备采用《中国药典》2005年版Ⅰ部丹参药材中丹参酮ⅡA含量测定项下的方法制备。

2.4 对照品溶液的制备精密称取丹参酮ⅡA对照品10.02 mg，置50 ml棕色瓶中，加甲醇稀释至刻度，另取2 ml置25 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得丹参酮ⅡA对照品溶液(16.03 μg/ml)。

2.5 线性关系考察按“2.2”项下的色谱条件，分别用自动进样器进5，7.5，10，15，20，25 μl的上述对照品溶液，记录色谱图。以浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，线性回归，得方程: Y=1 744.1X-21.93，r= 0.999 3(n=6)，结果表明丹参酮ⅡA 0.080 2～0.400 8 μg间呈良好的线性关系。

2.6 精密度和稳定性实验取“2.4”项下的对照品溶液，连续进样6次，记录丹参酮ⅡA的峰面积，计算RSD=1.33%(n=6)。并于室温下放置2，4，6，8，12，24 h后测定，计算测定丹参酮ⅡA峰面积的得RSD=1.72% (n=6)，峰面积积分值基本不变。

2.7 回收率实验精密称取已知含量的丹参药材样品6份，同“2.3”项下方法，制成供试品溶液，取供试品溶液1 ml，置1 000 ml的容量瓶中，加入丹参酮ⅡA对照品0.015 0 mg，用甲醇稀释到刻度，采用改进后的方法进行测定，并计算回收率。结果见表1，平均回收率为97.90%，RSD为1.37%。表1 丹参酮ⅡA对照品回收率测定结果取样量m/g样品含量m/mg加入量m/mg测得量m/mg回收率(%)平均回收率(%)

2.8 样品测定采用改进的测定方法和药典方法分别对同一批丹参药材中的丹参酮ⅡA进行了测定，结果表明两种测定方法结果无显著性差异(P>0.05)，结果见表2表2 两种测定方法对同一批次样品测定结果测定方法样品序号丹参酮ⅡA含量(%) 。见图1～4。图1 药典测定方法下丹参酮ⅡA对照品HPLC图谱图2 改进的测定方法下丹参酮ⅡA对照品C图谱图3 药典测定方法下丹参样品的HPLC图谱图4 改进的测定方法下丹参样品的HPLC图谱

3 讨论

测定结果表明，改进的测定方法测定丹参样品时，丹参酮ⅡA主峰和其它峰分离度R大于1.5;主峰拖尾因子T在0.98～1.03间，符合《中国药典》2005版Ⅰ部的要求。两种方法对同一批次的丹参药材测定的结果没有显著性差异(P>0.05)，但改进的测定方法可以将测定时间大大缩短，同时节约流动相，此方法经济、快速，是非常值得推荐的一种替代方法。