关于新型重组人肿瘤坏死因子在小鼠体内的药代动力学

作者：赵宁张英起王增禄高连用顾以保李全胜蔡永明曾勇陈拯民刘昌孝

【关键词】 肿瘤坏死因子α 关键词: 肿瘤坏死因子α;药代动力学;放射测量术;小鼠 摘 要:目的 研究新型重组人肿瘤坏死因子（nrhTNFα）在小鼠体内的药代动力学. 方法 采用125 I标记的nrhTNFα同位素法，观察im和iv后的体内过程. 结果 按10，20和40μg・kg-1 3个剂量给小鼠im nrhTNFα后在1～2h达到峰浓度，总放射性在体内消除较快，t1/2 为4.7～6.5h，所得结果均证明Cmax 和AUC与剂量呈显著相关（r=0.95），与iv给药（10μg・kg-1 ）的血药浓度进行绝对生物利用度试验，其im给药生物利用度为0.803.nrhTNFα在体内的分布以肾含量最高，脑浓度最低，但都低于同时间的血药浓度.按10μg・kg-1 im给药后，用RA法测定尿和粪24h放射性总量，尿中放射性回收率为86.8%，粪中回收率为9.5%，总排泄量达给药剂量的96.3%. 结论 nrhTNFα在小鼠的体内代动力学符合二室模型. Keywords:tumor necrosis factor;pharmacokinetics;radiom-etry;mice Abstract:AIM To study the pharmacokinetics of new re-combinant human tumor necrosis factor alpha（nrhTNFα）in mice.METHODS 125 I isotope labelled nrhTNFαmethods were used.RESULTS nrhTNFαcan rapidly enter into blood circulation after the mice are given nrhTNFαim in10μg・kg-1 ，20μg・kg-1 and40μg・kg-1 in then it reached the peak concentration in1～2h，t 1/2 was4.7～6.5h.The re-sults from the three doses demonstrate that Cmax and AUC are related to doses significantly.The absolute bioavailability of nrhTNFαgiven imwas0.803，compared with blood concen-trations obtained by iv in10μg・kg-1 .The levels of nrhTNFαin blood ranked first，kidney second，and brain last.After the mice are injected im in10μg・kg-1 ，86.8%radioactivity is recovered from urine，9.5%from feces，total discharge amount is up to96.3%of the amount given.CON┐CLUSION The pharmacokinetic of nrhTNFαin mice could be applied to two compartment model. 0 引言 TNF已经得以广泛研究和应用［1-9］ .用基因工程技术生产的重组人TNF-α显示出与天然TNF相同的体内外抗肿瘤活性［10］ .但因其毒性太大［11］ ，未被FDA批准上市，因此各国都在研制TNF衍生物，以降低毒副反应.本中心研制了一种新型重组人肿瘤坏死因子（nrhTNFα）.我们在药效学研究的基础上，参考nrhTNFα在小鼠药代动力学的研究文献［12-15］，采用125 I标记nrhTNFα的放射性同位素法（RA）进行了nrhTNFα的小鼠药代动力学研究. 1 材料和方法 1.1 材料 nrhTNFα为本中心制备，经HPLC-GFC分析，纯度为97.5%.FT-630型γ计数仪购自北京核仪器厂.昆明种小鼠，雌雄兼用，体质量18～22g，由天津药物研究院动物室生产并提供.125 I-nrhTNFα的制备采用Iodogen法进行nrhTNFα的125 I标记.使用sephacyl S-200凝胶色谱柱分离纯化125 I-nrhTNFα，测定放射浓度为1.48×109 Bq・L-1 ，放射比活性为1.59×109 Bq・mg-1 ，放射化学纯度在95%以上. 1.2 方法 放射活性测定法（RA法）按文献［15］进行. 2 结果 2.1 总放射性浓度 3组小鼠按10，20和40μg・kg-1 125 I-nrhTNFα剂量给药，im，另一组小鼠按10μg・kg-1 125 I-nrhTNFα剂量给药，iv，分别于0.083，0.25，0.5，1，2，3，4，6，8，16，24h，由眼眶采血，分离血清，取血清20μL置于测定管中，进行放射性测定.每时间点取6只小鼠，3雌3雄（Fig1）.可见肌注给药组吸收迅速，各时间点的总放射活性与给药剂量相关.将相同剂量（10μg・kg-1 ）、不同给药途径（im和iv）、不同时间的总放射活性进行比较，可见，给药2h后，两种途径给药的总放射性变化趋势基本一致. 图1 略 2.2 药代参数 将Fig1的实验数据用3P87药代计算程序进行数据处理，不论静脉还是肌肉给药，均以二室模型拟合药物浓度“-”时间曲线为适宜，自动计算出药代参数，肌肉给药的t1/2α 在0.19～0.33h范围，t1/2β 在5h左右，Tpeak在1h左右，Cmax 和AUC均随剂量的增加而增大，呈现明显的剂量相关（r=0.95，Tab1）.由肌肉和静脉给药的浓度数值经统计矩计算得到的AUC来计算出nrhTNF的绝对生物利用度为0.803. 2.3 组织分布 按10μg・kg-1 剂量给小鼠用药，im，0.1mL/只（含125 I-nrhTNFα1.85×104 Bq/只），给药前20min给NaI0.2mL（含NaI20mg，ip）. 给药后0.5，1，2，4，8h处死动物，取脑、心、肺、肝、 脾、肾、胃、小肠、肌肉、脂肪、卵巢、子宫、睾丸和血液，每一脏器取样100mg（不足100mg者，记录实际质量），分离血清，取20μL置于测定管中，进行总放射活性计数，再根据校正曲线计算出每克组织放射活性，每时间点取样6只动物，3雌3雄.在给药后0.5h，放射活性从高到低的顺序为血液、肾、肺、肝、小肠、肌肉、胃、心、脂肪、脾、卵巢、睾丸、子宫和脑;给药后8h仍能测到放射活性，其分布顺序为血液、肾、肺、肝、胃、肌肉、脾、心、小肠、脂肪、睾丸、子宫、卵巢和脑（Fig2）. 表1 总放射性测定的nrhTNFα药代参数略 图2 略 2.4 排泄实验 小鼠4只，2雌2雄，按前法用NaI处理，给予nrhTNF10μg・kg-1 （含125 I-nrhTNFα1.85×104 Bq/只，im）放入代谢笼内，收集0-2，2-4，4-8，8-12，12-24h的尿样和粪样.取尿样置于测定管内，用γ-计数器测定放射活性，结果从累计放射量来看，给药后2h由尿排泄约为给药剂量50%的放射量，给药24h排泄86%的放射量，表明125 I-nrhTNF主要是由尿排泄（Fig3）.将收集到的粪样制成匀浆后测定不同时间段的放射活性（Fig3），24h累计粪排泄量为所给剂量的9.5%，而且主要是给药后8h内排泄的.