小鼠血浆葛根素的含量及其药代动力学研究

作者：胥秀英，郑一敏，傅善权，冉长青

【摘要】 目的小鼠血浆中葛根素的含量及药代动力学研究。方法采用高效液相色谱法，流动相为甲醇-水（23∶77），流速1.0 ml·min-1，检测波长250 nm，柱温为25℃。结果葛根提取物口服后15min血液中即可检出葛根素，在体内呈二室模型分布，其主要药动学参数为A=1121.105 mg·L-1；B=237.5469 mg.L-1；α=0.6825 h-1；β=0.0459 h-1；Kα=1.3693 h-1；t1/2α= 1.015 6 h；t1/2β=15.0984 h；K10 =0.13 h-1 ；K21= 0.230 5 h-1 ；K12=0.362 h-1； Cmax=456.637 6 mg·L-1；Tmax=1.242 7 h；AUC=5 824.714 4 mg·h·ml-1。结论葛根提取物口服后葛根素在小鼠体内吸收快、消除慢。

【关键词】 高效液相色谱 葛根素 药代动力学

Abstract:ObjectiveTo determine the peurarin and pharmacokinetic in mouse plasma. MethodsHPLC method was used in the study .The analysis was carried out on Phenomenex Luna C18 column. The mobile phase was MeOH-H2O (23∶77).Flow rate 1.0 ml·min-1， wavelength 254 nm， temperature 25℃.ResultsThe results indicated that peurarin was detected after p.o. 15 min and the plasma C-T curve conform to two-compartment open model.The Pharmacokinetic parameter was below ：A=1 121.105 mg·L-1；B=237.5469 mg·L-1；α=0.6825 h-1；β=0.045 9 h-1；Kα=1.3693 h-1；t1/2α= 1.015 6 h；t12β=15.098 4 h；K10 =0.13 h-1 ；K21= 0.230 5 h-1；K12=0.362 h-1； Cmax=456.637 6 mg·L-1 ；Tmax=1.242 7 h；AUC=5 824.714 4 mg·h·ml-1。ConclusionThe peurarin is absorbed very fast and eliminates slow in mice.

Key words:HPLC； Peurarin ； Pharmacokinetic

葛根Radix Puerariae为常用中药，性平，味甘辛，有解表退热，生津止渴等功能，其主要有效成分葛根黄酮有改善脑循环及改善外周循环的作用，葛根素能明显缓解心绞痛，降低心肌耗氧量，改变心肌缺血等［1］，临床作为心血管系统疾病，糖尿病，高血脂病的辅助治疗药物［2］。本文对葛根提取物中葛根素在动物体内的含量及药代动力学的研究报道如下。

1 材料与仪器

1.1 药品与试剂

葛根素对照品购自中国药品生物制品检定所；葛根提取物为本实验室自制；乙腈为进口色谱纯（美国TEDIA公司）；其他试剂为国产分析纯；水为纯水。

1.2 动物及给药方式

昆明种小鼠体重为18～22 g，雌雄各半，为重庆市中药研究院实验动物研究室提供，葛根提取物剂量为10 g·kg-1，给药方式为口服。

1.3 仪器

岛津HPLC色谱仪（LC-10ATVP泵，SCL-10AVP控制器，SPD-10AVP紫外检测器，CTO-10AVP柱温箱，CLASS-VP6.10工作站）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［3］

采用色谱柱Phenomenex Luna C18（4.6 mm ×150 mm，5 μm），流动相经筛选以甲醇-水（23∶77）为最好，流速1.0 ml·min-1，检测波长250 nm，柱温室温。高效液相色谱数据由CLASS-VP6.10工作站处理，血药浓度-时间数据由3P87软件处理，得出主要的药代动力学参数。

2.2 生物样品制备

取小鼠7只，分别口服等量的葛根提取物，于给药后15 ，30 min，1，1.5，2，2.5，3，4，5，7 ，10 h眼眶取血，肝素抗凝，3 000 r·min-1离心15 min，分离血浆，取0.2 ml上清液加入2 ml甲醇充分混合，3 000 r·min-1离心5 min，上清液于干燥箱烘干，残渣加入0.2 ml甲醇超声溶解，0.45 μm滤膜滤过备用。

2.3 方法专属性考察

按2.2方法处理含药血浆和空白血浆样品，各进样20μl，得HPLC色谱图（图1），葛根素分离度达1.5，无杂质峰干扰。

2.4 稳定性考察

取处理好的血浆样品，分别于0，2，4，8，12 h在上述色谱条件下进样20 μl，计算葛根素的峰面积，RSD为2.07%，即样品在12 h内稳定。

2.5 线性关系考察

于空白血浆中加入葛根素对照品，使血药浓度为0.055 g·L-1，在上述色谱条件下，分别进样不同体积记录峰面积，以葛根素峰面积为Y轴，葛根素的进样量为X轴，由CLASS-VP6.10工作站，计算得葛根素回归方程，其线性关系良好，分别为：Y=4.1893×106X-727.779，r=0.999 6，线性范围为0.055 ～ 0.660 μg。

2.6 回收率和精密度实验

于空白血浆中加入高、中、低3个浓度的葛根素对照品液，按样品处理方法处理并测定，3个浓度血浆中葛根素的平均回收率103.41%，日内精密度为2.49%，日间精密度为3.16%。

2.7 葛根素的吸收

小鼠口服葛根提取物后，体内血药浓度在2 h达高峰（见表1），2 h后开始下降，口服葛根提取物体内为二室模型分布，其体内药时曲线见图2，各项动力学参数见表2。 表1 口服葛根提取物后不同时间体内葛根素的含量（略）表2 小鼠血浆中的主要药物动力学参数（略）

3 讨论

葛根提取物口服后药代动力学试验表明，该药口服吸收好，口服后30 min体内即可检出，2 h达高峰，2 h后开始下降进入消除相。其主要药动学参数为A=1 121.105 mg·L-1；B=237.546 9 mg·L-1；α=0.6825 h-1；β=0.045 9 h-1；Kα=1.369 3 h-1；t1/2α= 1.015 6 h；t1/2β=15.098 4 h；K10 =0.13 h-1 ；K21= 0.230 5 h-1；K12=0.362 h-1；Cmax=456.637 6 mg·L-1；Tmax=1.242 7 h；AUC=5 824.714 4 mg·h·ml-1。

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