盐酸伐昔洛韦片在健康人体的药代动力学和相对生物利用度

作者：胡晓，张红，夏春华，陈月江

【关键词】 盐酸伐昔洛韦片；阿昔洛韦；色谱法，高压液相；药代动力学；生物利用度

Pharmacokinetics and relative bioavailability of valaciclovir hydrochloride tablets in Chinese healthy volunteers

【Abstract】 AIM: To study the pharmacokinetics and relative bioavailability of valaciclovir hydrochloride tablets and evaluate its bioequivalence. METHODS: A single oral dose 600 mg of 2 valaciclovir hydrochloride tablets was given to 18 healthy volunteers in an open randomized crossover study. The concentration of acyclovir in plasma was determined by HPLC at different time points within 14 h following administration. The pharmacokinetic parameters were calculated by BAPP 2.0 software and the bioequivalence was evaluated by two onesided t test and 90%confidence intervals. RESULTS: The calibration curve of acyclovir was linear in the range of 0.1~4.0 μg/mL (r=0.9999)， and an intraday and interday RSD of<7.00% was observed. The concentrationtime curve after administration was best fitted to a one compartment open model， and main pharmacokinetic parameters were as follows: Tmax were (1.50±0.40) and (1.40±0.40) h; Cmax were (2.70±0.68) and (2.87±0.75) μg/mL; t1/2 were (3.00±0.65) and (3.28±0.67) h; AUC0-14 were 9.07±2.43 and 9.71±2.70 μg・h/mL. The relative bioavailability of the test preparations compared with the reference preparations was (96.4±23.7)%. There was no statistically singnificant difference in parameters Tmax， t1/2， Cmax， MRT， AUC0-14 and AUC0-∞ between the 2 products (P>0.05). CONCLUSION: The 2 valaciclovir hydrochloride tablets were bioequivalent. 【Keywords】 valaciclovir hydrochloride tablet; acyclovir; chromatography， high pressure liquid; pharmacokinetics; biological availability

【摘要】 目的： 研究盐酸伐昔洛韦片在健康人体的药代动力学和相对生物利用度，为临床合理用药提供依据. 方法： 采用双周期、单中心、开放、自身交叉对照的研究方法，18例健康志愿者随机分为两组，单次，交叉口服盐酸伐昔洛韦片600 mg后，以HPLC法测定血浆中阿昔洛韦的浓度，采用BAPP2.0软件进行数据处理，计算药代动力学参数. 结果： HPLC法测定阿昔洛韦的线性范围为0.1~4.0 μg/mL(r=0.9999)，日内和日间RSD均小于7.00%. 试验与参比制剂的药时曲线可用一室模型拟合，两者主要药代动力学参数Tmax分别为(1.50±0.40)，(1.40±0.40) h; Cmax分别为(2.70±0.68)，(2.87±0.75) μg/mL. t1/2分别为(3.00±0.65)，(3.28±0.67) h；AUC0-14分别为(9.07±2.43)，(9.71±2.70) μg・h/mL. 两种盐酸伐昔洛韦片主要药动学参数间均无显著性差异(P>0.05). 供试制剂对参比制剂的相对生物利用度为 (96.4±23.7)%. 结论： 供试制剂和参比制剂具有生物等效性.

【关键词】 盐酸伐昔洛韦片；阿昔洛韦；色谱法，高压液相；药代动力学；生物利用度

0引言

盐酸伐昔洛韦（valaciclovir hydrochloride）是阿昔洛韦（acyclovir）的L缬氨酸酯盐酸盐，为阿昔洛韦的前体药物，口服后在体内迅速转化为阿昔洛韦而发挥抗病毒作用. 与阿昔洛韦相比，盐酸伐昔洛韦具有水溶性好，口服吸收迅速，生物利用度高，血浆半衰期长等药代动力学特点. 在临床上用于水痘，带状疱疹及Ⅰ型，Ⅱ型单纯疱疹病毒感染，包括初发和复发的生殖器疱疹病毒感染的治疗，具有起效快，疗效好，用药量小，服药次数少，疗程短，不良反应少等优点［1-3］. 本研究对国内两厂家生产的盐酸伐昔洛韦片进行了药代动力学和生物等效性评价，旨在为临床合理用药提供依据.

1材料和方法

1.1材料① 仪器： LC2010A高效液相色谱仪，日本岛津；GS15R贝克曼高速冷冻离心机，XW80A旋涡混合器，Sartorius电子天平，台湾艾柯实验室专用超纯水机等. ② 试剂和药品： 甲醇，庚烷磺酸钠均为色谱纯，购自山东禹王实业有限公司；十二烷基磺酸钠和醋酸钠均为分析纯，购自上海试剂一厂；试验用水为符合美国F900实验室标准的超纯化水；供试制剂盐酸伐昔洛韦片(300 mg/片，批号： 040401)由宜都东阳光制药有限公司研制；参比制剂盐酸伐昔洛韦片(300 mg/片，批号： 050104) 由丽珠集团丽珠制药厂研制；阿昔洛韦标准品购自中国药品生物制品检定所，含量为99.6%(批号： 630200001). ③ 色谱条件： 色谱柱为Diamonsil C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm，迪马公司）；流动相为甲醇∶水（含0.001 mol/L庚烷磺酸钠，0.0004 mol/L十二烷基磺酸钠及0.003 mol/L醋酸钠，pH为3.9）=5∶95，流速为1.0 mL/min，紫外检测波长为252 nm，柱温为28℃. 1.2方法 1.2.1血浆样品处理取血浆0.2 mL，加入100 mL/L三氯醋酸0.2 mL，旋涡混匀1 min，19 000 g离心5 min后，取上清液30 μL进样. 1.2.2标准曲线的制备配制成含阿昔洛韦标准品0.1， 0.2， 0.4， 0.8， 1.6， 3.2和4.0 mg/L系列血样，分别按血浆样品处理方法处理后进样. 将测得的峰面积(As)对浓度(C)进行直线回归，得阿昔洛韦标准曲线及其回归方程(n=5)，血浆阿昔洛韦的线性范围为0.1~4.0 mg/L，回归方程为As=58196C-497.77， r=0.9999，最低定量浓度为0.1 mg/L. 1.2.3回收率试验精密配制含阿昔洛韦3.2，0.8和0.2 mg/L的系列血样，各浓度均为5份，按1.2.1的方法操作，另配制相应浓度的标准溶液，不经萃取直接以等量进样，分别测其峰面积，两组峰面积进行比较，计算血浆中阿昔洛韦的绝对回收率. 再精密配制浓度为3.2，0.8和0.2 mg/L阿昔洛韦标准血样各5份，按1.2.1的方法操作进样，以标准曲线方程计算其检出量与加入量的比值，得相对回收率(表1).

表1人血浆中阿昔洛韦回收率（略）

RSD： 相对标准差.

1.2.4精密度试验在标准曲线范围内，选择3.2， 0.8， 0.2 mg/L 3个浓度的阿昔洛韦标准血样，按1.2.1的方法操作，每一浓度制备并测定5个样品，3 d连续制备并测定3个分析批，求得日内RSD分别为5.00%，3.85%，5.10%；日间RSD分别为5.26%，6.50%，6.84%. 1.2.5受试者及试验设计18名男性健康志愿者，年龄（21.2±5.3）岁，身高（170.3±3.0） cm，体质量（61.8±3.8） kg，均在标准范围内. 获得伦理委员会批准，志愿者签署知情同意书. 既往无心、肝、肾、消化道、神经系统、精神异常、代谢异常等疾病，无药物和食物过敏史. 试验前接受全面体检，其血、尿常规、肝、肾功能、心率、血压、心电图等均为正常. 试验采用双周期、单中心、开放、随机、自身交叉对照的研究方法，将18例受试者随机分为A，B两组，于试验前1 d进入Ⅰ期临床试验病房，统一进清淡平衡膳食，给药前1 d晚餐后，禁食不禁水12 h后，于次日晨分别服用供试制剂或参比制剂600 mg，用200 mL温开水送服. 于服药前（0 h）及服药后0.5， 1.0， 1.5， 2.0， 3.0， 4.0， 5.0， 6.0， 8.0， 10.0， 12.0和14.0 h采集上肢静脉血4 mL至肝素化试管中，3000 rpm离心10 min，分离出血浆置-20℃冷冻保存，14 d内待测. 交叉服药前有1 wk洗净期.

2结果

2.1色谱行为在上述色谱条件下，获得给药前空白血浆、 空白血浆加标准阿昔洛韦及受试者服用盐酸伐昔洛韦片后的血浆样品色谱图（图1），可见阿昔洛韦保留时间约为13.5 min，各峰分离良好，无杂峰干扰测定. 2.2药代动力学18名受试者单次口服盐酸伐昔洛韦片受试制剂或参比制剂600 mg后平均药时曲线均符合一房室模型(图2). 供试制剂和参比制剂的主要药代动力学参数分别为： Tmax (1.50±0.40)和(1.40±0.40) h; T1/2(ke) (3.00±0.65)和(3.28±0.67) h. Cmax (2.70±0.68)和(2.87±0.75) mg/L. 平均滞留时间（MRT ）(4.11±0.55)和(4.29±0.67 ) h. AUC0-14 (9.07±2.43)和(9.71±2.70) mg/L， AUC0-∞(9.66±2.42)和(10.36±2.75) mg/L.

2.3生物等效性评价两制剂药代动力学参数AUC0-t， Cmax经对数转换，进行方差分析和双向单侧t检验，Tmax取实测值进行非参数秩和检验. 结果表明l n(AUC0-t)， l n(Cmax)在制剂间、周期间差异均无统计学意义，而个体间差异有统计学意义. AUC0-t的［12α］置信区间为85.25%～103.27%，在80%~125%内；供试制剂和参比制剂的相对生物利用度为(96.4±23.7)%. Cmax的［12α］置信区间为86.00%～104.02%，在70%~143%内，表明两制剂具有生物等效. Tmax非参数检验结果差异无统计学意义S=16.5>S0.05(10)=8， P>0.05.

A： 空白血浆；B： 空白血浆＋阿昔洛韦标准品；C： 受试者口服盐酸伐昔洛韦后4 h的血样. 图1阿昔洛韦血浆样品分析色谱图 （略）

图2健康志愿者口服600 mg盐酸伐昔洛韦片的平均药时曲线（略）

3讨论

阿昔洛韦体内浓度测定多采用高效液相紫外检测法，由于水溶性大，难以采用液液萃取法将阿昔洛韦从血浆样品中获得满意的分离. 本实验采用直接蛋白沉淀法，比较了多种蛋白沉淀剂对血样的处理效果，结果是用等体积100 mL/L三氯醋酸沉淀蛋白效果好. 在流动相的考察中，发现在单纯的甲醇水［4-6］体系中，阿昔洛韦峰形差且无法与血浆中杂质分离. 考虑到阿昔洛韦的结构特点，在甲醇水体系中加入适量离子对试剂使其成为离子对色谱，在考察中发现，单用庚烷磺酸钠作为离子对试剂［7］，虽然阿昔洛韦峰形得到很好的改善，但还是无法与血浆中杂质完全分离. 经过摸索发现在含0.001 mol/L庚烷磺酸钠及0.003 mol/L醋酸钠的甲醇水体系加入0.0004 mol/L十二烷基磺酸钠，改变流动相的选择性，结果阿昔洛韦峰形好，保留时间恒定，且血浆中无杂峰干扰测定. 采用本方法测定血浆中阿昔洛韦的浓度在0.1~4.0mg/L浓度范围内线性关系良好（r=0.9999），精密度和准确性均符合生物样本分析的要求，适用于伐昔洛韦的人体药代动力学和生物等效性研究. 本试验供试与参比两制剂的主要药代动力学参数，如Cmax， AUC， Tmax， T1/2与文献报道基本一致［6］，且差异无统计学意义，表明两者在吸收程度及吸收速度上具有生物等效性.

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