通脉口服液防治Ⅱ期糖尿病肾病的药效学研究

作者：张再康，杨霓芝，苏敬文，毕胤龙，高燕翔，彭钰，马红岩，左琪

【摘要】 目的 研究通脉口服液防治早期糖尿病肾病的作用机制。方法 采用右肾切除加腹腔一次性注射链脲佐菌素建立糖尿病肾病动物模型。通脉口服液治疗组给予通脉口服液灌胃，正常组和模型组给予等量的蒸馏水灌胃，时间为8周。给药结束后，观察大鼠一般情况、肾脏肥大指数、24 h尿量、血糖、尿微量白蛋白、肾功能、血糖、血脂、肾脏病理的变化情况。结果 通脉口服液治疗组大鼠的一般情况明显好于模型组，体重明显增长(P＜0.01)，肾脏肥大指数明显下降(P＜0.01)，血糖明显下降(P＜0.01)，血清尿素氮和肌酐明显下降(P＜0.01)，肾脏病理损害得到明显的改善，24 h尿量和血脂无明显变化。结论 通脉口服液通过控制血糖和改善肾血流动力学防治Ⅱ期糖尿病肾病。

【关键词】 Ⅱ期糖尿病肾病；通脉口服液；药效学；动物模型

Abstract：Objective To investigate the effect of Tongmai oral liquid on the early diabetic nephropathy. Methods Diabetic nephropathy rats were induced by excision of the right kidney and a single intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ). Forty male Wistar rats were pided randomly into 3 groups：Tongmai group， nephrotic model group， and normal group. At the end of the 8th week， the rats general states and some parameters such as kidney hypertrophy index， 24 h urine volume， blood glucose， 24 h urinary microalbumin (24 h UMA)， renal function [serum creatinine (Cr)， blood urea nitrogen (BUN)]， serum lipid， and the change of nephritic pathologic lesion were measured. Result Compared with the model group， general states in Tongmai group were improved， there was a considerable increase on body weight (P＜0.01). Compared with the model group， there was a significantly decrease (P＜0.01) on the kidney hypertrophy index， blood glucose， BUN and Cr in Tongmai group. The pathologic lesion in kidney morphology were also ameliorated obviously. But there were no remarkable differences in the 24 h urine volume and serum lipid index. Conclusion Tongmai oral liquid can prevent and cure the Ⅱ period diabetic nephropathy by controlling blood glucose and improving renal hemodynamics. Key words：Ⅱ period diabetic nephropathy；Tongmai oral liquid；pharmacodynamics；animal model 近年越来越重视的是糖尿病肾病的早期肾脏病变，此时，如给予适当的临床干预，可使肾小球高滤过率(GFR)下降，增大的肾脏逐渐恢复正常，从而使病变过程得到遏止甚至逆转。对糖尿病肾病早期诊断、早期治疗是研究糖尿病肾病的重点和突破口[1]。因此，我们开展了中医药干预糖尿病肾病Ⅰ～Ⅲ期的研究。

1 材料与方法

1.1 动物

健康Wistar雄性大鼠45只，体重(200±20)g，河北省实验动物中心提供，合格证号：DK0408-0034。

1.2 药物

通脉口服液，主要由黄芪、三七等药材组成，广东省中医院制剂室制备，批号071101。链脲佐菌素(STZ)，批号B69776， Sigma公司生产，使用时将STZ溶于新配制的0.1 mol/L枸橼 酸缓冲液中(pH 4.5)，制成2%(20 mg/mL)的溶液。

1.3 主要试剂

血糖试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号080302；UMA试剂盒，潍坊三维生物工程集团有限公司，批号080104；尿素氮试剂盒，保定长城临床试剂有限公司，批号080124；肌酐试剂盒，北京北化康泰临床试剂有限公司，批号080223。

1.4 主要仪器

LYZER-2000半自动生化分析仪、XH-6020 C型γ免疫计数器，德国豪迈公司。

1.5 分组与造模

1.6 统计学方法

采用SPSS11.5统计软件进行统计分析，所有数据均用x±s表示，多组均数比较用ANOVA分析，两两比较用q检验。

2 结果

2.1 对糖尿病肾病大鼠一般情况的影响 实验期间，正常组生长良好，饮食正常，反应灵敏。模型组大鼠逐渐出现多饮、多尿、消瘦，竖毛弓背，蜷卧扎堆，活动减少，精神萎靡，舌质紫黯，皮毛凌乱，色枯无泽，实验后期出现腹水、白内障等情况。通脉组大鼠总体情况均较模型组为轻，精神较好，毛色较光泽，体重明显增长，实验后期个别大鼠也出现腹水、白内障等情况。模型组和通脉组均有5只大鼠因相互撕咬或其他原因受伤感染致死。

2.2 对糖尿病肾病大鼠体重的影响

(见表1)表1 通脉口服液对糖尿病肾病大鼠体重的影响(略x±s)注：与正常组比较，*P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.01(下同)

2.3 对糖尿病肾病大鼠肾脏肥大指数的影响

(见表2)表2 通脉口服液对糖尿病肾病大鼠肾脏肥大指数的影响(略)注：肾脏肥大指数＝左肾的重量×2/体重

2.4 对糖尿病肾病大鼠24 h尿量、血糖的影响

(见表3)表3 通脉口服液对糖尿病肾病大鼠24 h尿量、血糖的影响(略)

2.5 对糖尿病肾病大鼠血脂的影响

(见表4)表4 通脉口服液对糖尿病肾病大鼠血脂的影响(略) 2.6 对糖尿病肾病大鼠肾功能的影响

(见表5)表5 通脉口服液对糖尿病肾病大鼠BUN、Cr的影响(略)

2.7 对糖尿病肾病大鼠24 h尿微量白蛋白的影响

(见表6) 表6 各组糖尿病肾病大鼠24 h UMA浓度值（略）

2.8 对PAS 染色的肾小球病理损害的影响 正常组肾小球未见异常变化。模型组大鼠肾小球体积增大，囊腔变小，部分毛细血管管腔扩张，部分毛细血管管腔闭塞，系膜细胞增生，系膜区嗜复红蛋白呈弥漫性沉积。通脉组肾小球毛细血管襻开放较好，系膜基质呈局灶性沉积。

2.9 对肾小球细胞超微结构的影响

正常组肾小球毛细血管内皮细胞窗孔排列规则，基膜均匀完整，足细胞足突结构清晰、无融合，呈分枝样排列于基膜外侧，足细胞裂孔膜正常。模型组血管内皮细胞增生明显，呈球状，突出到血管腔内，基底膜部分区域呈局灶性增厚，部分足突节段性消失。通脉组基底膜正常，部分血管内皮增生，部分足突融合变短。说明通脉口服液能修复糖尿病肾病肾小球超微结构的损害。

3 讨论

我们制造的糖尿病肾病大鼠在8周内尚未导致明显的白蛋白漏出，说明该糖尿病肾病大鼠仍处在糖尿病肾病Ⅰ期或糖尿病肾病Ⅱ期，糖尿病肾病早期还尚未达到。但结合肾脏肥大指数以及肾小球微观结构病理结果进行综合分析，可以肯定，该模型处在糖尿病肾病Ⅱ期。这有利于观察中医药早期防治糖尿病肾病的疗效。杨霓芝教授根据糖尿病肾病临床表现和现代病理机制，认为气虚血瘀证是糖尿病肾病的基本证型，益气活血法为治疗糖尿病肾病的基本治法，并且应贯穿于糖尿病肾病治疗的全过程。根据这一主导思想创制了通脉口服液，临床治疗糖尿病肾病取得了良好疗效。本实验结果表明，通脉口服液能够改善糖尿病肾病的机理主要体现在以下两方面：①控制血糖：通脉口服液能够明显降低血糖，说明通脉口服液对肾脏保护作用与糖代谢关系密切。②改善肾血流动力学：通脉口服液能够降低糖尿病肾病Ⅱ期大鼠肾脏肥大指数，减轻肾小球毛细血管管腔扩张，减轻系膜细胞的增殖和细胞外基质在系膜区的积聚扩张，减轻肾小球基底膜增厚和毛细血管内皮细胞增生，说明通脉口服液可以改善糖尿病肾病肾脏血流动力学。

2型糖尿病患者多伴有脂代谢紊乱，主要表现为TG升高和HDL-C水平下降，是影响糖尿病肾病发生发展的一项独立危险因素，在促进尿蛋白排泄，加重肾脏损害中起重要作用。本实验通脉口服液降低血脂作用不明显，提示我们临床应适当配伍既符合传统中医治疗糖尿病肾病的理论和临床实践又具有降低血脂药理作用的中药可能更好。