蒲薏颗粒药效学实验研究

作者：迟明艳 黄勇 王爱民 兰燕宇 王永林

【摘要】 目的对蒲薏颗粒进行药效学研究。方法观察蒲薏颗粒对荷瘤(H22)小鼠增效减毒作用，对艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延长率的影响，对体外培养人食管癌(ECA-109)细胞的影响，对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果蒲薏颗粒能增强化疗药物抑瘤作用、拮抗化疗药物对WBC及骨髓有核细胞的抑制;对艾氏腹水癌小鼠生存时间有明显的延长作用;并显著抑制ECA-109细胞增殖的细胞毒作用;同时该药具有提高小鼠细胞免疫功能的作用。结论蒲薏颗粒具有抗癌和增强免疫作用。

【关键词】 蒲薏颗粒; 抗肿瘤; 免疫增强

蒲薏颗粒由蒲公英、生薏苡仁等5味中药组成，具有清热解毒、活血化瘀、补益气血的功效，临床用于肿瘤放、化疗所致的气血两虚有很好的疗效，我们根据其功能主治进行了有关的主要药效学实验。

1 材料

1.1 动物 KM小鼠，雄性，体重18～22 g;SD大鼠，雄性，体重180～210 g，均由贵阳医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(黔)2002-0001。BALB/C小鼠(SPF级)，雄性，体重16～20 g，简阳市简城比尔动物养殖场提供，动物合格证号：0011159。

1.2 瘤株 小鼠肝癌H22：由华西医科大学肿瘤研究所提供;艾氏腹水癌(EAC)细胞，由重庆医科大学生物工程系超声研究所提供。人食管癌细胞(ECA-109)：由中科院生命科学研究所提供。

1.3 药物 蒲薏颗粒(PY)由贵州渝生制药有限公司提供，每克颗粒含4g生药，批号：20030306;环磷酰胺(CTX)，上海华联制药有限公司生产，批号：031001;5-氟尿嘧啶(5-Fu)，上海旭东海普药业有限公司生产，批号：030405;噻唑蓝(MTT)：Sigma公司出品，批号：206-069-5。

2 方法与结果

2.1 蒲薏颗粒对小鼠肝癌H22化疗的增效减毒作用[1～3]在无菌条件下于小鼠右腋皮下接种2×107/ml的H22细胞悬液，0.2 ml/只，24 h后按体重随机分为模型对照组，5-Fu组，PY高、低剂量组，5-Fu加PY高剂量组，5-Fu加PY低剂量组。各组小鼠按表1的剂量灌胃(ig)给药，1次/d，连续10 d，模型对照组给予等量生理盐水(NS)。停药次日称重后，摘眼球取血作外周血象检查，脱颈椎处死动物，剖取并称重瘤块，计算抑瘤率。剥离小鼠右股骨，用1640培养液通过针头反复冲洗骨髓并测定洗液中骨髓有核细胞数。见表1。

肿瘤抑制率(%)=(1-实验组平均瘤重对照组平均瘤重)×100%

由表1结果可见，蒲薏颗粒与5-Fu合用，可使5-Fu的肿瘤抑制率明显提高;白细胞、骨髓有核细胞计数也有显著性差异(P<0.05或P<0.01);提示蒲薏颗粒具有增效减毒的作用。表1 对小鼠肝癌H22化疗的增效减毒作用与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01;与5-Fu组比较，#P<0.05，##P<0.01;n=10

2.2 蒲薏颗粒对艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延长率的影响 [4～5]于无菌条件下小鼠腹腔常规接种艾氏腹水癌小鼠(1×108/ml)的细胞悬液，瘤液0.2 ml/只，接种后24 h，按体重随机分为5组：模型对照组，CTX组(20 mg/kg)，PY高、中、低剂量组，各组小鼠按表2的剂量ig给药，1次/d，连续10 d，模型对照组给予等量NS。记录存活天数，计算生命延长率，比较各组间差异。结果见表2。

生命延长率(%)=给药组平均生存时间-对照组平均生存时间对照组平均生存时间×100%表2 蒲薏颗粒对艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延长率的影响由表2结果可见，蒲薏颗粒高、中、低剂量组EAC荷瘤小鼠生存时间与模型对照组比较均有显著差异，生命延长率最高达50%以上，表明该药对艾氏腹水癌小鼠生存时间有明显的延长作用。

2.3 对体外培养人食管癌(ECA-109)细胞的影响[1]取大鼠30只，随机分为对照组(NS 10 ml/kg)、环磷酰胺组 (20 mg/kg)、蒲薏颗粒组(12 g/kg)。各组动物分别ig给药，1次/d，连续7 d。末次ig后2 h乙醚麻醉，无菌条件下股动脉取血，4℃ 2 500 r/min离心25 min，吸取血清，同组血清混匀，以0.22 μm微孔滤膜正压过滤除菌，各组保留部分全血清，其余血清用1 640分别配成含鼠血清60%，30%，15%的培养基，-40℃保存备用。

取在对数生长期的人食管癌细胞标准株(ECA-109)，用胰酶消化后，稀释成 1×105个/ml，台盼蓝染色，检测活细胞达95%以上。分别将肿瘤细胞接种于96孔板，每孔100 μl，培养24 h后，观察细胞贴壁后，分别换成含不同浓度大鼠血清培养基，每组10个平行孔。培养24 h，每孔内加入5 mg/ml MTT10 μl，继续培养4 h，弃去培养孔内培养基，每孔加入二甲基亚砜100 μl，待蓝色结晶完全溶解后，用酶标仪(波长490 nm)测定各孔吸光度(A)。见表3。

细胞毒活性(%)=(1-实验组OD值对照组OD值)×100%表3 含药血清对ECA-109细胞的细胞毒活性与相应浓度对照组鼠血清比较，*P<0.05，**P<0.01;n=10

与相应血清浓度的对照组比较，蒲薏颗粒各剂量组的OD值明显减小，差异显著(P﹤0.05，P﹤0.01)，高剂量组细胞毒活性大于20%。显示蒲薏颗粒有显著的抑制ECA-109细胞增殖的细胞毒作用。

2.4 对荷瘤(S180)小鼠细胞免疫功能的影响BALB/C小鼠，在无菌条件下，接种S180细胞悬液，0.2 ml/只，接种后24 h，分组，给药方法见表4。分别于给药的第3天和第6天动物皮下注7%的2.4-二硝基氯苯丙酮液0.02 ml/只致敏。于第1次致敏的第10天，动物一侧耳用1%的2.4-二硝基氯苯甘油溶液0.02 ml进行涂布攻击，另侧耳作对照，24 h后处死动物，剪下两耳，打孔器取耳片，称重，以左右两耳片的重量差作为肿胀度，比较各组间差异。同时取胸腺、脾脏称重，计算胸腺指数和脾脏指数。见表4。

由表4结果可见，蒲薏颗粒可使荷瘤小鼠降低的迟发型超敏反应水平、胸腺指数和脾脏指数明显改善，具有提高荷瘤小鼠的细胞免疫水平作用。表4 对荷瘤(S180)小鼠细胞免疫功能的影响与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

3 讨论

“蒲薏颗粒”处方为贵州省民间中医祖传经验方，临床应用五十余年，由蒲公英、薏苡仁等5味药组成。方中蒲公英清热解毒、消肿散结，利尿通淋。现代药理学研究其主要成分蒲公英多糖是一种免疫促进剂，其抗癌活性与免疫激活效果有关[6];薏苡仁清热排脓、健脾渗湿，伸筋除痹痛，其中的薏苡仁内酯能抑制艾氏腹水癌，而且能参与机体免疫功能，提高机体的免疫监视[7]。方中其他3味药：何首乌、灵芝、三棱则扶正以助君臣药的祛邪之功。

本实验结果也表明，蒲薏颗粒确有抗癌和免疫增强作用，从而在实验研究上为蒲薏颗粒治疗恶性肿瘤提供了理论依据，同时印证了蒲薏颗粒的临床疗效。