白色念珠菌细胞壁β-葡聚糖升白细胞药效学作用的研究
崔 进 宁 莉 2006-07-01
2 结果 2.1 急性毒性学实验 通过急性毒性实验得到LD50值分别为：CABBG 36.8937mg/kg，CAABG 89.23549mg/kg，CAIBG 767.7753mg/kg；95%可信区间分别为CABBG组32.0052～42.5289mg/kg，CAABG组76.7182～103.8025mg/kg，CAIBG组663.748～888.106mg/kg。各实验组小鼠肉眼观察，除肝脏增大外未见明显变化，病理HE切片显示肝细胞有不同程度的肿胀和空泡变。 2.2 外周血白细胞变化 实验第5、7、9天CABBG、CAABG、CAIBG组小鼠外周血白细胞数、中性粒细胞数、单核细胞数均显著增高，其中第7天、第9天，CAIBG组白细胞数、单核细胞数较阳性对照组rhG-CSF升高，差异有显著性。
注：Note：*P＜0.05，compared with the normal control；**P＜0.05，compared with the positive control
注：Note：*P＜0.05，compared with the normal control；**P＜0.05，compared with the positive control
注：Note：*P＜0.05，compared with the positive control
2.3 脾脏、胸腺指数变化 实验第5、7、9天，各组小鼠胸腺指数比较，差异无显著性(P＞0.05)。各组小鼠给药后，脾脏指数均增加。
注：Note：*P＜0.05，compared with the positive control
2.4 药效学实验病理组织学改变 脾脏：白髓、红髓分界不甚清楚，红髓内细胞数增多，与空白对照组比较，CABBG、CAABG、CAIBG组脾窦出现较多的巨核细胞；骨髓：实验组小鼠骨髓细胞增生活跃，与空白对照组比较，CABBG、CAABG、CAIBG组的巨核细胞数增多，提示巨核细胞系增生活跃。 3 讨论 多能造血干细胞具有多向分化的潜能，成年小鼠体内的多能造血干细胞主要分布在脾脏和骨髓［3］。本研究显示，实验第7天时，各实验组白细胞总数、中性粒细胞数都较rhG-CSF高(P＜0.05)；实验第7天、第9天，CAIBG升高外周血白细胞、单核细胞数明显高于CABBG、CAABG和rhG-CSF(P＜0.05)，说明β-葡聚糖，尤其是CAIBG可刺激血液系统白细胞、中性粒细胞、单核细胞数不同程度的升高。实验第7天，CABBG、CAABG、CAIBG组小鼠脾脏指数均与rhG-CSF差异有显著性(P＜0.05)；第9天，CAIBG脾脏指数较rhG-CSF、CABBG、CAABG组高，统计学表明差异均具有显著性(P＜0.05)。与成年小鼠体内造血干细胞的分布一致，实验发现CABBG、CAABG、CAIBG组小鼠的组织病理学改变主要体现在骨髓和脾脏。与空白对照组比较，三组小鼠脾脏、骨髓巨核细胞数增多，CAIBG组要更明显。因此，综合外周血细胞数、脾脏指数、组织改变，我们推测β-葡聚糖在刺激小鼠外周血白细胞总数升高的过程中可能与刺激CFU-S增殖，向粒系、巨核系组细胞分化，进而生成粒细胞、单核细胞。 造血器官中基质细胞是造血微环境中重要的成分，与造血有关的基质细胞涉及到巨噬细胞、成纤维细胞、网状细胞、淋巴细胞、内皮细胞和载脂肪细胞。其中，巨噬细胞被证明是在造血发生过程中有重要作用的一个微环境因素。巨噬细胞可通过细胞相互作用和分泌CSF、Epo、BPA、PGE和IL-1因子，调节所有四系血细胞的生长和分化［4］。以往研究证实念珠菌多糖可刺激巨噬细胞释放细胞因子（CK）如IL-6、IL-8、IL-1、TNF等［5，6］。这些细胞因子可调控造血细胞的增殖活动：IL-1、TNF可刺激内皮细胞产生粒细胞集落刺激因子（G-CSF）及粒-巨噬系集落刺激因子（GM-CSF），G-CSF 和GM-CSF是使粒细胞和单核细胞的母细胞增殖分化的特异性诱导剂，并能刺激骨髓向外周血液释放成熟的中性粒细胞，缩短中性粒细胞的成熟期［7］。同时，CSF可作用于粒-单系祖细胞（CFU-GM），诱导其增殖分化。IL-1还能激活干细胞从G0期进入增殖周期，扩大干细胞池；可为早期干细胞对CSF起反应做准备，并诱导辅助细胞产生CSF及其他CK，从而间接调节造血。 β-葡聚糖是念珠菌重要的抗原决定簇［8］，单核细胞、巨噬细胞上都存在β-葡聚糖的特异性受体［9］。白色念珠菌的三种溶解性的β-葡聚糖，在结构上都是符合单核细胞、巨噬细胞上β-葡聚糖受体对于配体的要求，即能被特异识别β-（1→3）和β-（1→6）糖苷键［10］。巨噬细胞作为一类抗原递呈细胞（APC）摄取β-葡聚糖抗原，随后诱导性的表达高水平MHC，MHC与Th细胞上的TCR和CD4相互作用。使Th细胞功能增强，IL-2分泌增多，IL-2又能保持T细胞的存活与增殖Th细胞被激活后刺激B细胞分化、增殖［11］。实验中，小鼠脾脏指数的明显增加、脾脏、骨髓细胞增生，说明了β-葡聚糖在升高外周血白细胞的同时，也对激活机体的整个免疫系统活性产生影响。因此，CAABG、CABBG、CAIBG升高小鼠外周血白细胞总数、中性粒细胞和单核细胞的作用可能与各组β-葡聚糖能不同程度的被单核、巨噬细胞识别从而产生一系列细胞因子，刺激造血系统和促进中性粒细胞增殖有关。 免疫调节剂作为一种免疫治疗的药物已经广泛应用于临床。多糖作为一类免疫调节剂，不仅毒副作用小，资源丰富，而且具有明显的调节机体免疫系统的作用。本研究说明白色念珠菌β-葡聚糖尤其是不溶性的β-葡聚糖能显著增加小鼠脾重，并能对抗由CTX所致的小鼠脾脏萎缩及白细胞水平降低，是一种较好的免疫增强物质。
1 Kouki Ishitani.Antitumor activity of polygalactosamine isolated from Paecilomyces sp.I-1 strain.J Pharmacobio Dyn，1988，11：58. 2 Gopal PK，Sullivan PA，ShepHerd MG.Analysis of wall glucans from yeast，hypHal and germ-tube forming cells of Candida albicans.J Gen Microbiol，1984，130：3295-310. 3 祝彼得.造血干细胞研究进展.重庆医学院学报，1985，10：295. 4 徐丰彦，张镜如.人体生理学.北京：人民卫生出版社，1989，952-970. 5 LI Min，CHEN Yun，SHAO Feng，et al.Isolation and Purification of the Alkali-soluble β –glucan from Cell Wall of Candida albicans.Chin J Dermatol，2000，33(5)：311-313. 6 Manners D J，Masson A J，Patterson J C，et al.The structure of beta-(1→3)- D-glucan from yeast cell walls.Biochemical Journal，2000，135：31-36. 7 杨藻宏.临床用药的药理学基础.北京：北京科学技术文献出版社，1997，133. 8 Cassone A，Bistoni F，Cenci E，et al.Immunopotentiation of anticancer chemotherapy by Candida albicans，other yeasts and insoluble glucan in an experimental lympHoma model.Sabouraudia，1982，20(2)：115-125. 9 马学清.中药多糖的免疫增强作用.中国实验临床免疫学杂志，1996，8(2)：40. 10 LI Min，CHEN Qing，SUN Jun-jiang，et al.The effect of β–glucan of cell wall from Candida albicans on interleukin-6 and interleukin-8 production by human peripHeral blood mononuclear cells in vitro.J Clin Dermatol，2002，31(6)：349-350. 11 周光炎.免疫学，第6版.北京：人民卫生出版社，2002，87-100；105-115；148-160.
