脑康胶囊的定性定量分析

作者：何宇新， 李 玲， 李玉峰， 杨文宇

【关键词】 脑康胶囊

摘要：目的对脑康胶囊中丹参、川芎、葛根进行薄层色谱定性鉴别，并测定脑康胶囊中葛根素的含量。方法采用薄层色谱法（TLC）对上述3味药材进行鉴别，展开剂分别为苯醋酸乙酯(19∶1)、正己烷醋酸乙酯(9∶1)、氯仿甲醇水(78∶35∶10)的下层液；采用反相高效液相色谱法测定葛根素的含量，Diamonsil C18色谱柱(5 μm，150 mm×4.6 mm)，以甲醇0.015%磷酸溶液(23∶77)为流动相，流速为1.2 ml/min，柱温35℃，检测波长249 nm，测定。结果HPLC测定的线性范围为0.02～0.12 μg，相关系数r=0.999 9；胶囊中葛根素的平均回收率为98.53%，RSD=1.08%，n=6；精密度(RSD＜2%)良好。结论该法操作简便、快速、准确，适用于脑康胶囊中主要药材的定性鉴别和葛根素的含量测定。

关键词：葛根素； 脑康胶囊； 薄层色谱法； 高效液相色谱法

脑康胶囊系由葛根、川芎、丹参等药材组成的中药复方制剂，具有补益肝肾、填精补髓、活血通脉的功效。主要用于治疗脑动脉硬化症肝肾精亏兼瘀血阻络证，症见头晕头痛，神疲健忘，胸闷或痛，口干目涩，腰膝酸软，虚烦少寐等。为了控制本品的质量，笔者采用TLC法对制剂中所含的川芎、丹参、葛根等3味药材进行了薄层色谱鉴别实验，并采用HPLC法测定本品中葛根素的含量。经方法学研究表明，该方法具有简便易行、结果可靠、灵敏度高、重现性好、专属性强等特点，可作为脑康胶囊质量控制标准。

1 仪器与试药

美国Waters高效液相色谱仪(2690溶剂输送系统，996二极管阵列检测器，自动进样器，Millenium32数据管理系统)：葛根素、丹参酮ⅡA、川芎对照药材(中国药品生物制品检定所提供)；脑康胶囊和各种阴性胶囊由成都中医药大学药学院中药药剂学教研室提供(批号为：040902，040906，040910)；硅胶G(薄层层析用，青岛海洋化工厂)：甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 TLC鉴别实验

2.1.1 丹参的鉴别取本品内容物5 g，加乙醚30 ml，置水浴中加热回流1 h。滤过，滤液挥干，残渣加乙醇0.5 ml使溶解，作为供试品溶液。同法取缺丹参的阴性样品制成阴性对照品溶液，另取丹参酮ⅡA对照品，加乙醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［1］实验。吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯醋酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与丹参酮ⅡA对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红斑点，阴性对照品无此斑点。见图1。

2.1.2 川芎的鉴别取本品内容物5 g，加乙醚20 ml，置水浴上加热回流1 h，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。同法取缺川芎的阴性样品制成阴性对照品溶液。另取川芎对照药材1 g同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品无此斑点。见图2。

2.1.3 葛根的鉴别取样品5 g，置索氏提取器中，加乙醚30 ml置50 ℃水浴上回流提取2 h，弃去乙醚液；残渣加30 ml甲醇回流提取4 h，提取液蒸干，残渣加水20 ml使溶解并转移至分液漏斗中，加水饱和的正丁醇液萃取两次，20 ml/次，合并正丁醇液，浓缩至干，残渣加甲醇2 ml溶解，加于已处理好的聚酰胺柱(内径1.5 cm，填充高度约15 cm)上，用水80 ml洗脱，收集水洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2 ml溶解，作为供试品溶液。同法缺葛根的阴性样品制成阴性对照品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［1］实验。吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿甲醇水(78∶35∶10)的下层液(15 ℃以下放置过夜)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的淡蓝色荧光斑点，阴性无干扰。见图3。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件色谱柱Diamonsil C18(5 μm，150 mm×4.6 mm)；流动相 甲醇0.015%磷酸溶液(23∶77)；流速 1.2 ml/min；柱温 35 ℃；检测波长为249 nm；灵敏度0.001AUFS。在选定条件下，葛根素和样品中其它分色谱峰可基线分离，葛根素与其相邻色谱峰的分离度大于1.50；按葛根素峰计算，理论板数(N)为3 000以上，拖尾因子(T)为1.03［1］。

2.2.2 测定方法供试品溶液的制备：取本品内容物适量，研匀，取0.5 g，精密称定，置平底烧瓶中，加甲醇50 ml，称定重量，置水浴上回流45 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 ml，置10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 阴性样品溶液的制备：取脑康阴性胶囊(缺葛根)内容物适量，研匀，取0.5 g，精密称定，置平底烧瓶中，加甲醇50 ml，称定重量，置水浴上回流45 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 ml，置10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品适量，加甲醇制成每毫升含10 mg的溶液。测定：分别精密吸取对照品、供试品和阴性样品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，根据葛根素对照品的峰面积，计算出样品的含量。

2.2.3 测定结果标准曲线的制备：精密量取葛根素对照品溶液(10 μg/ml)2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0 μl进样，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归，得标准曲线方程为：C=2.591 4×107A＋1.935 9×103，r=0.999 9。结果表明，葛根素在0.02～0.12 μg范围内呈良好线性关系。精密度实验：精密吸取上述对照品溶液5 μl，重复进样5次，葛根素峰面积的相对标准差(RSD)＜2%，结果表明，精密度良好。稳定性实验：取样品供试液分别于0，2，4，8，12 h进样10 μl，测得样品中葛根素峰面积值的相对标准偏差＜2%，结果表明，样品供试液在12 h内稳定性良好。重复性实验：按拟定的含量测定方法，取同一批样品五份，分别制备样品供试液，测得峰面积值及含量，其相对标准偏差＜2%，结果表明，重复性好。回收率实验：取6份已知含量的样品约0.2 g，分别加入葛根素对照品溶液(10 mg/ml)75，150，225 μl照含量测定项下方法测定，结果，3种水平6次实验的加样回收率测定结果均在95%～105%之间，其平均值为98.53%，RSD为1.08%。

表1 回收率实验结果测定（略）

样品测定：照含量测定项下的方法，对三批脑康胶囊样品进行含量测定。结果见表2。

表2 样品含量测定结果mg批 （略）

3 讨论

各薄层鉴别经做阴性对照实验，结果表明除了被检出药味外，脑康胶囊中其它药味对主斑点无干扰，专属性强、重现性好、操作简便，可作为该品的定性控制指标。含量测定经做阴性对照实验，结果脑康胶囊中其它药味对葛根素的含量测定无干扰，表明本法专属性强，可作为该品的定量控制指标。

［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社，2000:158，附录ⅥB.