甲磺酸加替沙星胶囊人体药代动力学及生物等效性评价

【关键词】 甲磺酸加替沙星

Assessment on pharmacokinetics and bioavailability of gatifloxacin mesylate capsules in healthy volunteers

【Abstract】 AIM: To study the pharmacokinetic parameters and bioavailability of gatifloxacin mesylate capsules. METHODS: An open， randomized， twoperiod crossover study was conducted in 18 healthy volunteers. Concentrations of gatifloxacin in plasma were assayed by HPLC after a single oral dose of 400 mg of the tested capsules or the referenced tablets. The main pharmacokinetic parameters ［AUC（0-24h）， Cmax and Tmax］ were analyzed by two onesided t test. RESULTS: The concentrationtime curve after medication conformed to onecompartment open model with a first order absorption. Tmax， Cmax and AUC(0-24h) of the tested capsules and the referenced tablet were（1.51±0.39） and （1.54±0.40） h， （3.48±0.84） and （3.43±0.96） mg・L-1，（34.51±8.49） and （33.04±10.25）mg・h・L-1 respectively. The relative bioavailability of the tested capsules tothe referenced tablets was 107.4%. CONCLUSION: The gatifloxacin mesylate has characteristic of quick absorption， high peak concentration in plasma and longer mean retention time; The result of statistical analysis showed that two formulations were bioequivalent (P>0.05).

【Keywords】 Gatifloxacin mesylate (GTFX・MSL); pharmacokinetics; biological aviatitity， chromatography， high pressure liquiol

【摘要】 目的： 研究甲磺酸加替沙星胶囊在健康人体内的药代动力学及相对生物等效性. 方法： 采用双周期随机交叉、自身对照试验设计法，将18例男性健康志愿者随机分为两组，分别单剂量口服甲磺酸加替沙星胶囊400 mg（试验品）和甲磺酸加替沙星片400 mg（参照品），经1 w清洗期后交叉换药，以高效液相色谱法测定受试者服药后血浆中加替沙星的经时浓度，计算加替沙星药动学参数，以双单侧t检验统计法比较两种甲磺酸加替沙星制剂是否具有生物等效性. 结果： 甲磺酸加替沙星在人体内的处置为一级吸收单室模型，试验品和参照品的主要药动学参数Tmax（实测值）、Cmax（实测值）、AUC（0-24h）分别为：为(1.51±0.39)和(1.54±0.40) h，(3.48±0.84)和(3.43±0.96) mg・L-1，(34.51±8.49)和(33.04±10.25) mg・h・L-1；试验品的相对生物利用度为107.4%. 结论： 甲磺酸加替沙星具有口服后吸收快、血药浓度较高、体内平均滞留时间（MRT）较长的特点；两种甲磺酸加替沙星制剂在人体内具有生物等效性(P>0.05).

【关键词】 甲磺酸加替沙星；药代动力学；生物利用度；色谱法，高压液相

0引言

甲磺酸加替沙星（Gatifloxacin mesylate GTFX・MSL）是近3年由我国研制的第四代喹诺酮类药物，属国家一类新药. 与前三代喹诺酮类药物相比，甲磺酸加替沙星不但扩大了抗菌谱［1，2］，降低了喹诺酮类药物特有的光稳定性差的缺点［1］，而且其抗菌活性更强［3，4］. 甲磺酸加替沙星与日本杏林制药株式会社研发的盐酸加替沙星相比，改善了水溶性差的不足，更易于机体吸收. 目前，关于甲磺酸加替沙星在人体内的药动学及生物等效性研究国内外报道较少，我们采用HPLC法研究甲磺酸加替沙星胶囊在健康人体内的药代动力学特征及相对生物等效性，以期为该药今后在临床安全有效、合理经济的使用提供依据［5-7］. 1材料和方法

1.1材料① 仪器：LC10AVP高效液相色谱系统（Shimadzu， Japan），含两台LC10ATvp型7725型进样阀（配100 μL定量环），CTO10Asvp柱箱，Classvp 5.032色谱工作站(Shimadzu，Japan)，Shimpack CLCODS C18分析色谱柱（150 mm×6 mm， 5 μm），甲醇为色谱级，其它试剂均为分析纯. ②药品： 受试品甲磺酸加替沙星胶囊(河南康泰制药集团公司，批号20010922， 100 mg/粒); 参照品甲磺酸加替沙星片 (河南康泰制药集团公司， 批号20010920，100 mg/片). 甲磺酸加替沙星对照品(中国药品生物制品检定所，含量77.8％). ③色谱条件： Shimpack CLCODS C18分析色谱柱（150 mm×6 mm， 5 μm）；流动相为∶甲醇∶水∶十二烷基硫酸钠=500 mL∶500 mL∶3.5 g(磷酸调pH=3.0)，流速1 mL・min-1，检测波长为292 nm.

1.2方法

1.2.1柱效及对称因子测试在上述条件下，以加替沙星标准液测试，理论塔板数为7408，柱效良好，对称因子为1.03，可满足试验测试的要求（0.95-1.05）.

1.2.2血浆样品测定精取待测样品血浆 0.5 mL于尖底2 mL的离心试管中，精密加入200 mL・L-1的高氯酸200 μL，漩涡振荡1 min，离心8 min（10500 g），取上清液100 μL进样，外标法定量，Classvp5.032色谱工作站自动计算并打印加替沙星的色谱峰面积，将峰面积代入标准曲线方程，求出加替沙星的血浆浓度.

1.2.3标准曲线的制备取空白混合人血浆2.0 mL共7份，分置于试管中，加入适量加替沙星标准液，使血浆中加替沙星浓度依次分别为0.15， 0.31， 0.62， 1.24， 2.48， 4.96和9.92 mg・L-1，按下述血浆样品测定方法操作，以加替沙星的血浆浓度C（mg・L-1）对加替沙星的色谱峰面积（A）作线性回归，求得加替沙星的标准曲线方程为：C=2.973×10-6A-0.0722 (r =0.999， n=6).

1.2.4方法回收率取空白血浆3份，加入适量的加替沙星标准液，分别配成高、中、低3个浓度的加替沙星样品4.96， 1.24和0.31 mg・L-1，按样品测定法各测定含量6次，计算方法回收率x±s，依次分别为(97.21±1.25)%， (96.54±1.94)% 和(96.40±2.41)%.

1.2.5方法精密度取空白血浆加入适量加替沙星标准液，配制成高、中、低浓度分别为4.96， 1.24和0.31 mg・L-1血浆样品，在一日内按样品测定法重复测定6次，求得加替沙星日内RSD分别为1.02%， 1.75%， 5.56%. 将上述3个浓度的样品在8 d内陆续各重复测定6次，求得对应的日间RSD分别为1.64%， 3.47%和7.34%.

1.2.6志愿者及实验设计18例男性健康志愿者，年龄18~40岁，质量（60.8±7.6） kg，身高(169.6±3.5) cm;血 、尿常规、肝功、肾功及心电图检查均正常，无药物过敏史，试验方案经西京医院伦理委员会批准通过. 西京医院临床药理基地与18人均签署知情同意书. 将18人随机分为两组，试验前2 wk及实验期间禁服用其他任何药物，实验期间禁烟、酒及含咖啡因的饮料. 两组受试者在禁食10 h后于次日晨分别空腹用240 mL温开水口服试验品（400 mg）和参照品（400 mg）. 服药前抽取空白血样5 mL，服药后0.25， 0.5， 0.75， 1， 1.5， 2， 3， 6， 8， 12和24 h分别采静脉血5 mL，置无菌抗凝试管中，离心分离出血浆置于无菌干燥塑料管中，于-20℃闭光保存，经1 wk清洗期后两组受试者交叉换药，实验方法同前，在14 d内完成加替沙星的血药浓度测定.

1.2.7数据处理Tmax和Cmax均采用实测值，以梯形法求算AUC，以消除相血药浓度对数与时间的回归方程计算体内消除半衰期. 甲磺酸加替沙星的主要药代动力学参数详见Tab 1. 将AUC和Cmax参数进行对数转换后，以双单侧t检验法评价两种甲磺酸加替沙星制剂在人体内的相对生物等效性.

2结果

2.1色谱分离在本色谱条件下， 加替沙星保留时间为4.8 min，分离度良好，可确保分析方法的专一性(Fig 1). 血浆中加替沙星的最低检出浓度（按信噪比≥3计）为20 μg・L-1.

图1色谱分析方法专一性测试结果(略)

2.2药时曲线两种制剂交叉给予18 名受试者后，其药时曲线经拟合符合口服一室开放模型(Fig 2).

2.3药动学及生物等效性分析以梯形法求算两种甲磺酸加替沙星制剂的AUC(0-∞)， AUC（0-24h）， Tmax和Cmax采用实测值，以消除相血药浓度的对数与对应点时间的线性回归求算甲磺酸加替沙星胶囊的体内消除半衰期. 结果表明两种制剂在健康志愿者体内的处置均符合一级吸收一室开放模型，其主要药动学参数见表Tab 1. 以甲磺酸加替沙星胶囊为试验制剂，以甲磺酸加替沙星片为参比制剂，求得试验制剂的相对生物利用度为107.4%，将两种制剂的主要药动学参数Cmax， Tmax， 和AUC经双单侧t检验，结果表明，两种制剂具有相同的生物效应.

图2口服400 mg甲磺酸加替沙星后血浆中加替沙星的药时曲线(略)

表1口服400 mg甲磺酸加替沙星后的药动学参数(略)

3讨论

目前测定盐酸加替沙星血药浓度的方法主要有HPLC法［8］及微生物法［9］，本实验我们采用HPLC法测定血浆中甲磺酸加替沙星的浓度. 在流动相的选择上，经比较优化色谱条件［9，10］，我们确定流动相为甲醇∶水∶十二烷基硫酸钠=500mL∶500mL∶3.5 g(磷酸调pH=3.0)，结果显示药物与杂质分离良好. 在样品的预处理上采用一步蛋白沉淀法， 即利用甲磺酸加替沙星在酸性条件下易溶于水的特点，加入适量200 mL・L-1的高氯酸，在去除内源性蛋白杂质的同时将加替沙星溶于水相，再以高速离心后取上清直接进样分析，结果表明，本方法具有简便快速和误差较小的实用特点.

从Tab 1可知甲磺酸加替沙星片剂和胶囊剂在18 例健康受试者体内的处置情况较为相似，该结果与Annette等［9］和Christoph［10］等报道的盐酸加替沙星片基本一致［10-14］.从血药浓度测定结果可见，18 例受试者的Cmax 和AUC(0-24h)个体间的差异较大， 但同一受试者服用受试品和参照品后的Cmax和AUC(0-24h)相近，提示甲磺酸加替沙星有一定的个体差异，临床使用时应加以注意.

总之，经配对双单侧t检验结果表明，两种甲磺酸加替沙星制剂在健康人体内具有生物等效性，试验品对于参照品的相对生物利用度略高，为107.4%.

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