羧甲基壳聚糖人参总皂苷脂质体透皮效率研究及药效学初步考察

【摘要】 目的 考察人参总皂苷脂质体在羧甲基壳聚糖环境下的透皮效率以及对皮肤癌治疗的有效性。方法 使用改良Franz扩散池法测定透皮效率，以化学诱导皮肤癌的小鼠为药效学实验对象。结果 羧甲基壳聚糖对人参总皂苷透皮效率的影响通过两小样本t检验计算，P<0.05;以上两因素对于小鼠皮肤癌的作用组间比较采用配对t检验，P<0.05。结论 羧甲基壳聚糖对人参总皂苷脂质体透皮效率的促进有统计学意义;羧甲基壳聚糖和人参总皂苷的混合物对小鼠皮肤癌有效。

【关键词】 脂质体;透皮;皮肤癌

Abstract：Objective To study transdermal efficiency and pharmacodynamics of ginseng con-saponin liposome.Methods By using the method of modified Franz diffusion cell to test transdermal efficiency of the liposome of total ginsenoside in the environment of Chitosan， with mice suffering from skin cancer as the sample. Results The effect of rboxymethyl chitosan on total ginsenoside transdermal efficiency was tested and calculated by two small samplest， P<0.05，the effect of the two factors mentioned above on skin cancer in mice groups was tested by comparing between different groups or by Fisher exact test， P<0.05. Conclusions The effect of carboxymethyl chitosan on total ginsenoside liposome transdermal efficiency and on the skin cancer are statistically significant.

Key words: liposome; transdermal; skin cancer; drug effect

人参是在最早的药学经典《神农本草经》上就有记载的药物，人参总皂苷是人参中的主要生理活性物质，它有改善学习记忆、抑制细胞凋亡、降糖降脂等药理活性[1]。脂质体具有延长疗效、避免耐药性，还可以减少给药剂量和降低不良反应的效果。羧甲基壳聚糖是天然的透皮促渗剂，具有成膜性、抗炎性、生物相容性，同时可以抑制肿瘤血管内皮细胞形成使肿瘤的毛细血管不能加长，肿瘤组织不能向周围组织浸润或转移。因此，羧甲基壳聚糖可作为一种良好的药用基质广泛应用[2]。

本文将人参总皂苷脂质体置于羧甲基壳聚糖环境中研究其透皮效率变化以及其对由化学致癌物所诱导皮肤癌治疗的有效性，该研究将为皮肤癌的临床治疗提供新的思路。

1 材 料

1.1 实验动物

昆明种小鼠，雌雄各半，体重为(18±4)g(辽宁医学院实验动物中心)。

1.2 仪器

RE—52AA型旋转蒸发仪(上海安亭电子仪器厂);JY96-Ⅱ型超声波细胞粉碎仪(宁波新芝科学仪器研究所);紫外分光光度计(日本岛津);TP-3型智能透皮扩散仪(南京新联电子设备有限公司南京红蓝电子科技中心)。

1.3 试剂

人参总皂苷原料药(辽宁鑫泰药业有限公司);大豆磷脂酰胆碱 (上海金伴药业有限公司，批号20020904);胆固醇 (天津东方试剂厂，进口分装);羧甲基壳聚糖(北京洁尔爽高科技有限公司，型号SCJ-920);二甲基苯蒽(DMBA)(Fluka公司产品);丙酮(沈阳新化试剂厂);巴豆油(上海贝基生物科技有限公司，进口分装);乙醇(天津市科密欧化学试剂有限公司);三氯甲烷(国药集团化学试剂有限公司);乙醚(沈阳新化试剂厂)。

2 实验方法

2.1 羧甲基壳聚糖浓度的选择

配制1%～9%梯度浓度的羧甲基壳聚糖溶液，观察其在试管中的状态，以外观良好呈现半透明乳白色为标准。各浓度羧甲基壳聚糖均能在较长时间稳定保存脂质体，可以根据具体情况所需选择浓度。

2.2 羧甲基壳聚糖浓度对脂质体的影响

分别将各浓度的羧甲基壳聚糖溶液中加入等体积的人参总皂苷脂质体中混合均匀。于24、48、72 h后观察，发现混合液稳定性良好。将其涂于置于37℃水浴中的玻璃板上，观察各溶液的成膜时间。

2.3 实验动物的处理

将健康的昆明种小鼠采取颈椎脱臼的方法处死。用手术剪剪去其背部皮肤上较长的毛，然后用电动除毛刀除尽余毛。剪取背部皮肤上约2 cm×2 cm大小区域于生理盐水中冲洗干净。在电热板上快速移动以除去鼠皮上的皮下脂肪及粘液组织。将处理好的鼠皮置于生理盐水中在4 ℃储存，鼠皮必须在24 h内用完，以保证其生理活性。

2.4 体外透皮实验

体外透皮实验是采用改良Franz扩散池进行实验的，接受液为37 ℃的生理盐水。该装置由上下两个杯状玻璃组件对合而成，皮肤加在中间形成上下两室，上室是供给室，下室为接收室，在接收室的一侧连有一个上倾的管道，供取样、补充接收液或排除气泡使用。主体组件外有恒温水套层，实验时通入恒温水控制接收液温度。接收室底部放置磁力搅拌子，装置上下两部分用铁夹夹在一起。

将处理好的小鼠皮肤固定在供给池与接受池中间，角质层面向供给池，皮内层面向供给池。上下加紧后在接受池中注满接受液，在供应池分别取未加壳聚糖的人参总皂苷脂质体和溶液中有9%壳聚糖的人参总皂苷脂质体各1.0 mL置于供给池中;并在接受池中注满接受液，于(37±0.2)℃下恒温水浴。开启磁力搅拌器，将转子的转动速度调节为150 r×min定速搅拌。

于1，2，3，4，6，8，10，12 h共计8个时间点分别取出1.0 mL接受液，随后向接受池中补充等量等温的新鲜接受液。将取出的接受液用0.45 μm微孔滤膜过滤后，放入EP管中，置冰箱内保存，待测。

将处理好的接收液用浓度为95%的乙醇破乳后，分别用紫外分光光度法测定。

2.5 肿瘤诱发

将小鼠随机分组，每组10 只，雌雄各半。各组均给相同剂量的DMBA，即在第1天、5天和7天，分别将DMBA丙酮液(150 μg/200 μL)涂抹于小鼠背部脱去毛发暴露的皮肤处(脱毛于涂药前1 d进行)，共3 次;促癌阶段各组均给同剂量的巴豆油，在相同部位涂抹巴豆油丙酮液(0.25%)，每次200 μL/只，每周2 次，直至试验结束。

到实验结束时，空白组肿瘤诱发率80%，平均每鼠荷瘤数2.5个。

2.6 药效的初步考察

将等体积的壳聚糖环境下的人参总皂苷、人参总皂苷水溶液和蒸馏水涂布于小鼠无毛区，1 日3 次。

将壳聚糖环境下的人参总皂苷的涂布厚度达到1～1.5 mm，空白对照组涂抹至相同厚度。

2.7 统计分析方法 采用spss11.0统计软件进行数据分析。