紫草烧伤喷雾剂制备及药效学研究

【摘要】 目的研制紫草烧伤喷雾剂并进行初步药效学实验。方法选择最优工艺制备紫草烧伤喷雾剂，对其有效成分左旋紫草素进行定性鉴别和含量测定作为质量控制，采用实验性烧烫伤模型考察喷雾剂的治疗作用。结果工艺流程合理，制剂质量稳定，质检方法可控；动物实验表明，其具有抗炎促进创伤愈合的作用，缩短烫伤愈合时间显著提高。结论 紫草烧伤喷雾剂工艺合理 ，质量可控，对烧烫伤具有治疗作用。

【关键词】 紫草； 烧伤喷雾剂； 药效学

紫草为紫草科植物新疆紫草或内蒙紫草的干燥根，春秋二季采挖除去泥沙干燥面得新疆紫草（软紫草）Arnebia euchroma Royle主产于新疆西藏等地区；紫草（硬紫草）主产于黑龙江、吉林、辽宁、河北、湖南、广西等省区；内蒙紫草主产于内蒙古。紫草是我国的常用的中草药，味甘、咸、性寒、归心、肝经。具有凉血、活血，解毒透疹等功效。《本草纲目》曰：紫草“治斑疹。斑毒，活血凉血，利大便”。研究表明紫草还具有抗炎、抗过敏和影响免疫功能等作用［1］，其主要成分紫草红色素还是5种天然红色素中最好的一种，《中国药典》收载的品种为新疆紫草或蒙紫草的干燥根［2］。新疆紫草含萘醌色素化合物为4.40%～6.99%，主要功能有：凉血、活血、解毒透疹，用于血热毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、疮疡、湿疹、水火烫伤［2］。

现在临床广泛使用的紫草烧伤膏是在中医药理论指导下，充分发挥中医药治疗烧伤创疡的优势，应用于治疗烧伤创疡 ，由于膏剂使用不便，本课题在传统处方的基础上经过优选、重新组方、改变剂型形成新剂型的紫草烧伤喷雾剂。为烧伤的治疗提供新剂型。

1 器材

1.1 仪器 WS70红外线快速干燥器（上海锦屏仪器仪表有限公司通州分公司）、GZXDH40X45电热恒温干燥箱（上海市跃进医疗器械一厂）、恒温水浴锅（余姚亚星仪器仪表有限公司）、旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司）、岛津UV2401PC紫外-可见分光光度计（日本岛津），TGL16G高速离心机（上海安亭）。

1.2 原料与试剂

紫草、蒲公英、黄柏、冰片、乙醚、吐温80，蜂蜡，乙醇，硅胶G ，CMCNa，大豆油。

2 方法与结果

2.1 制备工艺［3］

2.1.1 处方组成紫草、蒲公英、黄柏、冰片等。

2.1.2 制法

取麻油加热；先后加入粉碎过的蒲公英、紫草，过滤。黄柏粉末用乙醇进行回流、蒸发、抽滤、调pH，抽滤后加入到已融化的蜂蜡中，充分搅拌后加到前面所得到的紫草油中，取冰片，溶于乙醚中，搅拌均匀即可。

2.2 质量标准研究［4，5］

2.2.1 左旋紫草素的含量测定

对照品溶液的制备：精密称取左旋紫草素标准品5.0 g，置于100 ml的容量瓶中，加入乙醇定容，即得到溶液浓度为0.05 mg/ml对照品标准液，贴标签放置备用。

供试品的制备：精密量取样品液0.5 ml，置于50 ml容量瓶中，定容，摇匀后即得供试品溶液，贴标签放置备用。

测定波长的选择 ：参考文献［4］以乙醇作为空白对照，将配制成一定浓度的供试品溶液和对照品标准液在波长400～600 nm范围内扫描，结果供试品溶液和对照品标准液均在516 nm处出现最大吸收峰，因此测定波长选择为516 nm。

标准曲线制备：精密吸取0.05 mg/ml左旋紫草素对照品标准液1，2，3，4，5 ml，分别置于10 ml容量瓶中，用乙醇定容；以乙醇做空白对照，在516 nm处测定其吸光度，以吸光度为纵坐标，左旋紫草素对照品标准液浓度为横坐标进行回归，回归方程为：A=18.771C+0.006 2，r=0.999 9，（r=5），左旋紫草在5～25 μg/ml浓度范围内线性关系良好。

稳定性实验：精密吸取供试品液适量，分别在0，0.5，1，2，3，4 h内重复测定其吸光度，所得RSD为1.8%，说明该供试品在4 h内稳定。

精密度考察：取供试品溶液，按含量测定项下测定5份，RSD为0.93%。

加样回收率实验 ：精密吸取1.5 ml供试品液，置于10 ml容量瓶中，加入适量0.062 mg/ml的左旋紫草素定容后测定含量。计算回收率，结果见表1。表1 加样回收率实验（略）

样品的含量测定 ：精密吸取供试液0.5 ml，加入乙醇定容至50 ml，乙醇做空白对照，于516 nm波长处测定其吸收度，带入标准曲线方程，计算含量，测得供试品中左旋紫草平均含量C=15.3%。 2.2.2 TLC鉴别实验 取适量样品0.5 ml，加95%乙醇5 ml， 摇匀后放置得样品液；另取阴性对照品0.5 ml，加 95%乙醇5 ml，摇匀放置后得空白液。以左旋紫色素为标准对照品，加乙醇配制成每毫升含 0.5 mg的标准品溶液。各取10 μl点于硅胶薄层板上，以甲苯∶醋酸乙酯∶甲酸(5∶1∶0.1)为展开剂上行展开，晾干置紫外灯518 nm观察，样品液与对照品在相应位置上显紫红色斑点。

2.3 刺激性实验

将紫草喷雾剂喷在剃去毛的家兔皮肤上(5.0 ml)，24 h后观察无红肿刺激现象出现。

2.4 药效学实验［6］

2.4.1 动物烫伤模型的建立

选用小鼠30只，清洁级，封闭群，体重在18～22 g左右，雌雄不拘。先涂上硫化钡糊剂，5 min后用玻璃棒轻轻刮去脱毛剂，再用清水将脱毛区洗净擦干即可。用70℃热水浸烫脱毛区15 s达浅Ⅱ度烫伤，80℃热水浸烫15 s达深Ⅱ度烫伤。

2.4.2 药物对小鼠的愈合作用

将30只大鼠随机分成6组，每组5只，分别为浅Ⅱ度烫伤和深Ⅱ度烫伤的紫草喷雾剂组，京万红治疗组和空白对照组。所有动物用0.3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，按照各组给药配方给药，紫草喷雾剂治疗组、京万红治疗组和空白对照组每日给药两次，观察动物的愈合时间及愈合面积。结果见表2。表2 药物对烫伤小鼠的愈合作用（略）表3 药物对浅Ⅱ度烫伤小鼠的治疗效果（略）

脱痂率=脱痂面积创面初始面积×100%

愈合率=愈合面积创面初始面积×100%

体征表现：给药1周时，空白对照组大鼠食欲不振、消瘦，体重明显减轻，其余各组食欲正常，活动自如，体重略有增加，无死亡情况。

愈合情况

紫草喷雾剂组：用药后3 d，3组大鼠的创面明显减少，7 d后有肉芽组织生成，20 d后多数大鼠创面基织生成；愈合创面有鼠毛长出。

空白对照组：创面脓汁较多、感染较重，更无肉芽组，7 d后有肉芽组织生成，20 d后多数大鼠创面基织生成，20 d后仍未愈合，或有小条状疤痕。25 d后处死所有的动物，并记录实验数据及现象。

实验表明：紫草喷雾剂组和空白对照组相比较，能迅速形成药痂，使水肿消退，明显促进创面愈合，疗效与京万红相当。

3 讨论

在紫草油的制备过程中应密切注意大豆油温度的控制，在薄层层析实验中，使用95%乙醇作为提取溶剂效果最佳，若使用甲醇，75%乙醇和无水乙醇，其效果均次于95%乙醇；同时考虑乙醚，氯仿，石油醚等其他有机溶剂，但考虑到在展开过程中凡士林在这3种溶剂中溶解度较大，影响测定结果，因此选择95%乙醇作为提取溶剂。

紫草烧伤喷雾剂组和空白对照组相比较，能形成药痂速度快，使水肿迅速消退，并明显促进创面愈合，紫草烧伤喷雾剂组和京万红药品对照组相比较，两组愈合时间相似，但两组脱痂时间不同，紫草烧伤喷雾剂组时间较短。紫草喷雾剂喷射在新鲜创面后，经3～5 min可形成一层透明药膜，再重喷2～3次，增厚药膜不致破裂，可促使药痂形成并保留完整。形成的药痂能阻断污染、细菌感染和外来刺激。对烫伤具有明显治疗作用，具有很好的医用价值。

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