高效液相色谱法在中药药代动力学的应用

【关键词】 高效液相色谱法 中药药代动力学

高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱对样品进行分离测定的色谱方法。对于分离分析挥发性低，热稳定性差分子量大的高分子化合物以及离子型化合物极为有利。血药浓度测定法是现代中药药代动力学常用的研究方法[1]，其中包括对指标成分明确的单味中草药和中药复方的研究。把药物通过一定给药方式加入机体后，可以通过监测药物以及一些内源性指标成分在血液中浓度的变化来对药物进行分析，如氨基酸、蛋白质、核酸、类脂、维生素、抗生素、生物碱等。高效液相色谱技术具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高等优点，在现代药代动力学研究中得到了广泛应用。

在药代动力学的分析过程中需要有指标成分明确的量反映资料来监测药物的分布排泄以及内源性指标成分的变化情况，来比较影响药物作用的因素，指导合理用药。利用高效液相的分离分析手段便可以从体液或组织中得到这些量反映资料。但测定方法的特异性、准确性的灵敏度将直接影响药代动力学研究的准确度，所以为了满足不同分析对象的要求，往往需要多种类型的检测器。本文以高效液相色谱法常用的检测器为线索综述了近年该方法在中药药代动力学研究中的应用。

1 高压液相——紫外检测器（UV）

紫外检测器是高效液相色谱法最常用的检测器，它的作用原理是基于被分析样品对特定波长紫外光的选择性吸收，样品浓度与吸光度的关系服从比尔定律。缪海军等[2]建立了以萘酚为内标测定血浆中水飞蓟宾的反相高效液相色谱法，得出水飞蓟宾的体内过程呈二室模型。其药代动力学参数分别为：吸收速率常数0.76h－1，分布相速率常数为1.21h－1，消除相速率常数为0.48h－1，药时曲线下面积为239.4ng.h.ml－1，分布体积为0.40mg.ml.ng－1，清除率为0.36mg.ml.ng－1.h－1。为水飞蓟宾的临床研究提供了一个简便灵敏的检测手段。

2 高压液相——示差折光检测器（RI）

示差折光检测器是利用连续测定流通池中溶液折射率变化的方法来测量样品浓度的。潘峰等[3]采用高效液相色谱示差（HPLC-RI）检测法测定烧伤病人尿中乳果糖、甘露醇的含量，对烧伤病人肠通透性变化的评价，探索出了一种有效、可靠、灵敏、快捷的实验方法。

3 高压液相——荧光检测器（FLD）

荧光检测器的原理是，物质被紫外光照射后，二次辐射出较长的波长（荧光），通过检测荧光的强度来确定洗脱液中有荧光效应的样品组分的含量。张锦雯等[4]建立了测定大氧血浆中大黄酸浓度的HPLC-荧光检测方法，并对大黄酸在大鼠体内的药代动力学行为进行研究，得出大黄酸灌胃后的药代动力学符合二室模型。金昔陆等[5]为阐明葛根素的代谢规律，建立了血浆中葛根素的高效液相色谱荧光检测法，摸索出了一套灵敏度高、操作简便的方法，把血浆经无水乙醇沉淀蛋白后上清液可直接进行测定，10min内出峰完毕，具有分析时间短、重现性好、特异性强及回收率好等优点，测得葛根素在狗体内的药时过程为线性动力学过程，符合开放式二室模型，T1/2A、T1/2B分别为6.0、57.4min。

此外，当指标成分自身不能产生荧光时可以通过衍生化反应生成能激发荧光的物质进而进行检测。付桂香等[6]利用反相高压液相色谱邻苯二甲醛柱前衍生化、荧光检测法建立了测定血清中精氨酸含量的方法。

4 高压液相——电化学检测器（ECD）

电化学检测器是一种高灵敏度的检测器，利用测量分析物的氧化还原电势来进行检测。李伟荣等[7]采用高效液相电化学检测的方法测定了大鼠下丘脑内组胺和5——羟色胺，由于HA在化学上属咪唑类，作为原始态的胺，不能直接进行荧光或电化学检测，须经衍生化反应以后才在电化学检测器（ECD）上有响应，采用临苯二甲醛——亚硫酸钠作为衍生试剂对大鼠下丘脑匀浆上清液内的HA进行柱前衍生后进样分析，测得结果为大鼠下丘脑内HA和5——HT的平均含量分别为0.280±0.029μg/ml和0.224±0.068μg/ml。

5 高压液相——质谱联用（MS）[8]

HPLC-MS联用技术集液相色谱的高分离与质谱的高灵敏度、极强的定性专属性于一体。质谱检测器具有更高的灵敏度，样品用量少，分析速度快应用范围广，在选择合适电离方法的前提下，一般化合物都能被电离得到检测，从而能获得更多的化合物结构信息。

王素军等[9]测定并建立了Beagle犬血浆中氧化苦参碱及其代谢物的LC——MS分析法，研究了氧化苦参碱及其代谢物药代学过程，研究结果为氧化苦参碱的代谢物苦参碱比母药达峰晚约0.9h，苦参碱的末段清除半衰期约为氧化苦参碱的2倍，消除较母药慢，二者血药浓度曲线下的面积均值之比约为0.95，表明有大量的氧化苦参碱在肠道经细菌转化为苦参碱而吸收入血。

总之，高效液相色谱方法吸取了经典液相色谱和气相色谱两种方法的优点，在分析分离已知化合物方面具有很大优势，其检测器也从固定单波长紫外检测器发展到可变波长紫外一可见光检测器、示差析光、荧光、电化学以及质谱检测器等。但由于中药及其复方物质基础的复杂性，在中药药代动力学研究中高压液相色谱技术还有待进一步完善。