霉茶总黄酮在大鼠体内的药代动力学

作者：王桂红，刘丹，吴杰，邴飞虹，张国斌，郑国华

【摘要】 目的研究霉茶总黄酮在大鼠体内的药代动力学。方法以蛇葡萄素为指标，高效液相色谱法(HPLC)测定给药后大鼠血清中蛇葡萄素的浓度。结果大鼠灌胃0.5 h后血清中即可检测出蛇葡萄素，霉茶总黄酮在大鼠体内呈一室模型分布，且药物在高、中、低剂量时的药物浓度变化比较一致。结论HPLC法适用于测定大鼠体内霉茶总黄酮血药浓度，总黄酮在大鼠体内吸收很快，浓度对药物的体内代谢行为没有明显影响。

【关键词】 霉茶总黄酮； 蛇葡萄素； 药代动力学； 大鼠； 高效液相色谱法

霉茶系葡萄科蛇葡萄属植物大叶蛇葡萄Ampelopsis.megalophylla Diels et. Gilg的枝叶加工而成，其主要活性成分为霉茶总黄酮，临床上用于降血压、降血脂［1］。有关霉茶总黄酮的药代动力学研究报道较少，为了进一步了解霉茶总黄酮的降压机制，本实验对霉茶总黄酮在大鼠体内的药代动力学进行了研究。

1 材料与仪器

1.1 药品与试剂

霉茶总黄酮、蛇葡萄素对照品（自制），乙腈(色谱纯)，霉茶总黄酮用4% CMC-Na溶液加热溶解成所需浓度。

1.2 动物

SD大鼠，体重200～250 g，雌雄各半，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，许可证号：SCXY（鄂）2004-00070。室温18～20℃，实验期间饲以该中心提供的固体饲料，自由饮水。

1.3 仪器

LG16-W型离心机（北京医用离心机厂）；XW-80A旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）；Agilent-1100系列高效液相色谱仪（四元泵）、紫外检测器及配套色谱工作站；Mettler-Toledo AG285型分析天平。

2 方法

2.1 色谱条件

色谱柱为Aichrom Bond-AQ C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）； YWG-C18 保护柱，检测波长为292 nm，流动相为乙腈-0.2%磷酸水（25∶75），流速为1.0 ml·min-1；柱温：30℃；进样量：5 μl。

2.2 血液样品的制备与处理［2］

取36只大鼠，禁食过夜，随机分为霉茶总黄酮高、中、低3个剂量组（灌胃剂量分别为：360，180，90 mg·kg-1），每只大鼠取6个时间点、3个平行，单次灌胃给药后分别于0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，10.0，12.0 h眶静脉取血0.5 ml，4 000 r·min-1离心10 min，分离出血浆，定量吸取血浆0.2 ml，加0.6 ml乙腈沉淀蛋白，涡流混旋10 min，4 000 r·min-1离心10 min，取上清液，滤膜滤过(0.45 μm)，进样5 μl，以峰面积进行定量。

2.3 对照品系列溶液的制备

分别精密称取蛇葡萄素对照品适量，以甲醇溶解并稀释至刻度配制成不同浓度的对照品储备液（1 200，800，600，400，200 μg·ml-1），4℃保存备用。精密吸取蛇葡萄素对照品储备液适量，加甲醇定容，梯度稀释为800，200，120，80，40，8，4 μg·ml-1的对照品溶液。

2.4 对照品系列模拟血浆样品的制备

分别精密吸取上述稀释的系列对照品溶液各0.1 ml，然后用大鼠空白血浆分别定容至1 ml，使血浆浓度分别为80，20，12，8，4，0.8，0.4μg·ml-1的对照品溶液。

2.5 数据处理 药物代谢动力学参数由MCPKP软件计算［3］。

3 结果

3.1 标准曲线的建立

含药血浆按前述“2.2”项下方法进行操作，分别进样0.002，0.004，0.02，0.04，0.06 μg，测定并记录蛇葡萄素的峰面积。以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），标准曲线如下：Y= 3 258X- 1.236，R = 0.999 9，线性范围0.002～0.06 μg，最低检测限为0.000 4 μg·ml-1。

3.2 方法回收率和精密度的考察

按照含药对照品系列溶液配制方法，配制不同浓度的血浆对照品溶液，依次为12，8，4μg·ml-1。然后按照“2.2”项下同法操作，精密进样5 μl，记录蛇葡萄素的峰面积。按照外标法，代入线性方程计算蛇葡萄素的血浆药物浓度，计算所得浓度与实际浓度的比值，并计算日内精密度。方法的回收率分别为：91.83%，93.75%，86.25%，日内精密度为：7.56%，6.40%，5.68%。连续3 d测定上述浓度样品，结果日间精密度为：8.02%，7.08%，6.72%。符合生物样品中药物定量分析研究的方法学要求。

3.3 稳定性实验

取与回收率实验用同样血浆对照品溶液9份，浓度为 12，8，4 μg·ml-1，每个浓度3个平行。按照血液样品制备方法预处理后室温放置4 h，24 h和经3，5，7 d 3次冷冻-解冻循环后蛇葡萄素的稳定性，RSD分别为：1.97%，2.90%，2.60%。不同浓度的含药血浆样品在放置7 d之内RSD<3%，表明样品在7 d内基本稳定。

3.4 蛇葡萄素的血药浓度测定

霉茶总黄酮高、中、低剂量组大鼠体内的蛇葡萄素血药浓度均在1.5～2.5 h达高峰，2.5 h后开始下降。血药浓度-时间数据由MCPKP软件处理，各项动力学参数见表1，血药浓度变化见图1。表1 药动学参数（略）

4 讨论 霉茶总黄酮的体内药物代谢符合一室模型。药物在高、中、低剂量时的药物浓度变化比较一致。整个药物的体内代谢符合一室模型，且药物均有一定的肝肠循环，在体内的生物半衰期时间为4.5～5.5 h左右，血药浓度较快到达最大值，但是会持续一个时间段，可能与蛇葡萄素的结构有相关性。

对于大部分的黄酮类化合物，肝脏和消化道是药物代谢的主要场所，药物在胃肠道内即发生代谢、吸收，进入体内的是其代谢产物而非原形成分［4］。据文献报道［5］，小鼠灌胃给药180 mg·kg-1，血清中仅有痕量蛇葡萄素。本实验在霉茶总黄酮最大耐受量［6］范围内按360，180，90 mg·kg-1给药，0.5 h后即可检测出蛇葡萄素，与以往报道不同。至于霉茶总黄酮在大鼠胃肠道内是否完全代谢分解，有待进一步研究。